绵羊精液稀释液、冷冻程序和离心除精浆的优化研究

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精液超低温冷冻保存技术是利用液氮作为冷冻源,经特殊处理后保存在超低温环境下,从而达到长期保存的目的。绵羊精子和其他物种相比,存在着生理生化方面的特性,对低温的抵抗力较其他动物低,因此绵羊精液冷冻后精子活率、顶体完整率等精子质量评价指标较低,冷冻效果一直不理想,难以在绵羊的人工授精中得以推广应用。为了提高绵羊冷冻精液品质,本实验以精液解冻后精子活率、顶体完整率、质膜完整率和谷草转氨酶及乳酸脱氢酶活性等为检测指标,对绵羊精液稀释液配方、细管冻精制作程序和离心除精浆技术进行了优化研究,实验结果如下:(1)在6种精液冷冻稀释液配方中,以含有D-果糖、柠檬酸和Tris的F配方冷冻效果最好,解冻后精子活率达到了0.41。(2)细管冻精制作过程中的精液最佳平衡时间为:2.5h,随着平衡时间的延长而解冻后精子品质开始降低;冷冻效果最好的是在温度为40℃,解冻时间为10s的条件下的解冻程序,解冻后精子活率极显著(P<0.01)高于解冻条件为70℃,6s下的解冻程序。(3)在精液冷冻的关键环节-精液冷冻降温速率中,以冷冻降温程序b(4℃~-15℃区间内降温速率;5℃/min,-15℃~-90℃区间内降温速率:20℃/min)为最优。(4)精液的最佳离心除精浆条件:离心速率为1250r/min,离心时间为5min。经过离心除精浆的解冻后精子活率极显著(P<0.01)高于不进行除精浆的精子活率。综上所述,本实验对绵羊精液超低温冷冻-解冻程序和冷冻稀释液配方以及离心除精浆技术进行了优化筛选,使绵羊精液解冻后活率达到0.35以上,可以满足生产需要。
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