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本研究共分为两部分,第一部分为5种商品化试剂提取病毒RNA的比较研究,对比了 5种商品化试剂的病毒核酸提取效果,第二部分建立猪唾液中检测PCV2的荧光定量方法及初步应用。1、选择商品化的3种细胞裂解液(RNAiso Plus、TRNzol Plus和RNAOUT)和2种DNA/RNA共提试剂盒(RNA-DNA双提试剂盒、快速DNA/RNA共提试剂盒),分别提取猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JXA1-R株、猪瘟病毒(CSFV)HCLV株和乙型脑炎病毒(JEV)SA-14-14-2株的RNA,通过RNA直接定量和Real-time PCR间接评价了抽提的RNA的质量。RNA直接检测结果表明,RNAiso Plus、TRNzol Plus和RNAOUT3种细胞裂解液抽提获得的RNA浓度相对较高;Real-time PCR间接检测结果表明,快速DNA/RNA共提试剂盒组RNA相对水平最高,RNAiso Plus和TRNzol Plus 2种细胞裂解液组其次。研究表明,RNAiso Plus、TRNzol Plus和RNAOUT 3种试剂可用于临床RNA病毒检测以及定量分析。2、猪圆环病毒病主要以圆环病毒2型为病原,造成猪断奶后多系统衰竭综合症、母猪繁殖障碍以及仔猪的中枢系统等疾病。唾液中含有病原和抗体,由于猪的唾液检测具有采集方法简单,成本低,对猪无刺激性等特点,越来越受到人们的重视,应用也越来越多。本实验旨在建立唾液检测的方法,将荧光定量PCR技术与唾液检测相结合,建立了唾液中检测PCV2的荧光定量方法。改进了唾液的采集方法和唾液中核酸提取的方法,其中建立的荧光定量方法只针对PCV2型。本实验通过扩增特定的基因片段,构建重组质粒,以重组质粒为模板,绘制了荧光定量方法的标准曲线。建立荧光定量方法经过特异性实验、敏感性实验、重复性实验等一系列实验,表明该方法具有特异性强、重复性好、灵敏度高的特点。本次建立的唾液中PCV2荧光定量检测方法比普通的PCR方法灵敏度高出1000倍。应用临床样本进一步验证了建立的唾液中PCV2荧光定量方法的可行性,本实验在2017年10-11月期间在江苏不同的4个猪场采集唾液样本33份,分别对采集的样本做普通PCR和荧光定量PCR的检测,对比检测结果发现,荧光定量PCR对各个猪场样本的阳性检出率都有所提高,能够更直接地表现出猪场猪群的PC2感染情况。通过临床样本的应用检测,证明了唾液作为检测样本进行疾病抗原检测的可行性,也进一步的研究唾液检测提供了依据。