急性心肌梗死患者外周血单个核细胞NADPH氧化酶2的表达和活性与氧化应激的关系研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:greenhight
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背景活性氧的增加与心血管疾病密切相关,有研究证实活性氧参与了动脉粥样硬化的病理过程。而产生活性氧的主要酶体之一是尼可酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NAPDH氧化酶,NOX)。NOX2主要分布在中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞中。NOX2激活能够产生活性氧,进一步引起LDL和蛋白的氧化。目前有关急性心肌梗死患者单个核细胞NOX2的表达和活性与氧化应激的关系的研究尚少,本研究就此问题作初步的探讨。目的探讨急性心肌梗死患者外周血单个核细胞NOX2的表达和活性与氧化应激的关系,为从抗氧化的角度防治心肌梗死和动脉粥样硬化提供理论依据。方法选择35例急性心肌梗死患者为AMI组,32例健康人为对照组。两组均空腹抽血查生化指标及Hs-CRP,通过检测血清中抗氧化酶类SOD的活性、脂类氧化应激标记物MDA、蛋白氧化应激标记物蛋白羰基化,对AMI组和正常对照组机体氧化应激状态进行全面分析。在此基础上,进一步用Real-time PCR及Western blot比较AMI组和正常对照组单个核细胞中NOX2及其亚组分的表达,并应用间接免疫荧光法对NOX2亚组分p47phox在细胞中的定位进行检测,比较AMI组和正常对照组NADPH氧化酶的活性。最后用SPSS软件对所检测的临床指标、氧化应激指标和NOX2及其亚组分的表达进行分析。结果(1)AMI组MDA为8.14±2.13(nmol/ml),明显高于对照组4.75±2.56(nmol/ml)(p<0.001)。AMI组血清蛋白羰基化水平明显高于正常组,为正常组的1.64倍(P<0.05)。AMI组SOD活力水平为89.14±5.93(U/ml),明显低于正常组100.00±8.87(U/ml),两组间有显著性差异(P<0.01)。AMI组和对照组的Hs-CRP水平分别为8.74±4.62(mg/dl)及0.22±0.56(mg/dl)(p<0.001)。(2)Real-timePCR的检测结果表明,AMI组和对照组的NOX2相对含量分别为1.62±0.76和0.96±0.58。与正常对照相比,AMI组单个核细胞中NOX2表达明显增加(P<0.001),而其它亚组分p47phox,p22phox的表达无明显差异。Western blot的结果与以上结果相一致。(3)在AMI组中,p47phox高度活化,活化率AMI组为59.59%,对照组为18.7%,存在显著差异(P<0.01)。(4)AMI组中FBS、TC、HDL、Hs-CRP和UA与对照组有显著性差异。相关性分析表明,NOX2和MDA的升高分别与Hs-CRP正相关。(5)AMI合并糖尿病与AMI无糖尿病患者NOX2、MDA、SOD和Hs-CRP的水平无明显差异。结论(1)AMI组患者血清中MDA和蛋白羰基化比对照组有明显的升高,而SOD水平下降,说明AMI时机体处于氧化应激状态,提示这种氧化应激可能与动脉粥样硬化斑块不稳定有关。(2)NOX2在AMI组患者血单个核细胞的表达比对照组明显增高,而p47phox和p22phox在两组的表达没有差异,但p47phox被活化,从细胞质易位到细胞膜。表明p47phox调控NOX2的活化。而NOX2被激活可能是ROS增高的主要原因。(3)AMI患者Hs—CRP比对照组明显升高,而NOX2和MDA的增高与Hs—CRP的升高成正相关。(4)AMI合并糖尿病与AMI无糖尿病患者NOX2、MDA、SOD和Hs-CRP的水平无明显差异,提示糖尿病在心梗急性期时可能不是影响氧化应激的主要因素。
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