罗非鱼胶原蛋白粉剂的低温制备工艺及促伤口愈合性能研究与评价

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胶原蛋白广泛存在于人体、哺乳动物的软骨、皮肤以及其他结缔组织中,是由自体制备的天然生物大分子。目前,市场上常见的胶原蛋白主要来源于牛等哺乳动物,由于此胶原蛋白具有人畜共患病的高危险性,也增加了胶原蛋白在应用于医用材料领域的潜在危险性。所以海洋来源的胶原成为了一种新式的胶原蛋白在创面止血和愈合领域应用广泛。因此,本文以罗非鱼鱼皮为原材料,提取其中丰富的胶原蛋白并进一步开发成一种创伤止血辅料,从而达到伤口止血和促愈合的功效。首先,采用酸法、碱法、酶法和热水浸提法将鱼胶原蛋白从罗非鱼皮中提取出来,寻找提取鱼胶原蛋白的最佳方法,随后采用单因素试验分别通过考察酶添加量、料液比和提取时间三个因素评估罗非鱼鱼皮胶原蛋白的提取效率。在单因素的基础上,通过Design-Expert软件设计三因素三水平的正交实验对胃蛋白酶法提取罗非鱼鱼皮胶原蛋白的工艺参数进行优化。然后,通过液氮冷冻粉碎得到低温制备的鱼胶原蛋白粉剂,对其进行性能理化分析,紫外吸收光谱、SDS-PAGE电泳图结果表明提取出的鱼胶原蛋白符合I型胶原蛋白的特性;CD分析以及FTIR红外光谱表明罗非鱼皮胶原蛋白三条肽链之间的螺旋程度较好,未发生变性;差示量热扫描结果表明,罗非鱼皮胶原蛋白的热变性温度为57.5℃。其次,因为本研究最终目标是开发医疗器械产品,因此按照《GB/T 16886生物学评价试验》系列标准对医疗器械进行生物学试验,以警示的方式判断产品的预期风险。通过细胞毒性试验结果表明胶原蛋白粉剂无细胞毒性;皮内反应试验结果表明其对皮内组织均无刺激性。急性全身毒性试验和植入试验结果为阴性,热原试验及溶血试验均符合标准要求,表明鱼胶原蛋白粉剂无论在创伤或植入机体后不会引起机体的免疫排斥反应,与生物体具有良好的相容性。最后,通过皮肤修复试验和肝脏止血试验,表明罗非鱼皮胶原蛋白粉剂具有良好的促进伤口愈合的效果和脏器止血效果。
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