嗜盐古菌Natrinema-IM-1的三个不同的蛋白酶基因的克隆及表达载体的构建

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古菌是一种区别于真核生物和细菌的生物,分为广古菌和泉古菌,其中嗜盐古菌是广古菌的一类分支,在高于30%盐浓度中也能够生长。蛋白酶是催化水解蛋白质的一类酶,主要作用于氨基酸间的肽键。蛋白酶在医药化工、食品生产以及酿酒纺织等多个方面具有广泛的应用价值。为了研究古菌来源的蛋白酶,本研究根据GenBnak中与本实验室保存的嗜盐古菌Natrinema-IM-1属于同一属的Natrinema-sp-J7-2的全基因组序列,分析其基因组序列,设计了特异性引物,成功克隆出Natrinema-IM-1的3种不同的蛋白酶基因,并与pET-28a(+)原核表达载体进行连接,成功构建出3个重组表达载体,分别命名为pET-28a-MDP、pET-28a-SP、pET-28a-P。该研究为在大肠杆菌中进行嗜盐古菌的protease、serine protease、Metal-dependent protease表达,分析它们的酶活性打下了基础,也为进一步开发利用嗜盐古菌蛋白酶提供了实验数据及理论基础。
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