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[目的]观察左旋咪唑(LMS)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠炎症细胞表面CD4、CD8的影响,以及对B7、CD28/CTLA-4协同刺激分子表达水平的影响,以进一步了解LMS促发EAE的病理生理过程中的重要环节.
[方法]雌性Wistar大鼠55只(150～180g)随机分成5组:LMS同时给药组(12只)、LMS预处理组(12只)、EAE模型组(12只)、LMS致敏组(12只)及对照(Control )组(7只).抗原致敏前一周,LMS预处理组每只给予LMS 10mg.kg<-1>,ip,bid×7d,其余各组每只给予NS 0.4 ml,ip,bid×7d.LMS同时给药组、LMS预处理组及EAE模型组用GPSCH+CFA抗原乳剂,每只大鼠四足脚垫皮下注射0.4ml以诱导EAE,LMS致敏组、Control组分别以LMS+CFA、NS+CFA为抗原乳剂,相同剂量致敏动物.LMS同时给药组和LMS致敏组每只大鼠给LMS(10mg/kg),于0、24、48h,ip,另外三组每只给予NS 0.4mL,用法相同.所有大鼠均予百日咳疫苗0.1ml(1×10<9>菌体)右腹股沟皮下注射.每天两次观察体重及行为学变化.致敏后第7、17及25d分别心脏采血5001μl,24h内送检.第25d处死动物,取一小段颈髓及脑组织以4﹪多聚甲醛固定,送做病理学检查.其余脊髓经Percoll液分离,提取单个核细胞,荧光抗体孵育标记后上流式细胞仪检测,CellQuest软件获取结果.每份样品至少分析1×10<4>个细胞,减取阴性对照后,以CD4、CD8、B7-1、B7-2、CD28及CTLA-4阳性细胞数的百分比表示CD4、CD8、B7-1、B7-2、CD28及CTLA-4分子的表达水平.
[结果]
(1)行为学观察结果:LMS同时给药组和LMS预处理组:发病率分别为10/12、9/12,与EAE模型组比较,无显著差异.潜伏期平均值分别为14.8±1.79、15.5±2.27,较EAE模型组明显缩短(P<0.05).症状评分平均值分别为3.2±0.79、3.1±0.84,较EAE模型组明显加重(P<0.01);LMS致敏组:有1只动物行为异常、易激惹,未观察到尾巴及肢体无力、麻痹等异常.
(2)病理学检查结果:LMS同时给药组和LMS预处理组:发病大鼠CNS炎性细胞浸润和脱髓鞘较EAE模型组有加重趋势.
(3)外周血及脊髓内炎症细胞表面CD4、CD8表达:抗原致敏后7d,LMS同时给药组和LMS预处理组外周血淋巴细胞表面CD4表达水平分别为53.96±5.80、54.55±5.84,较EAE模型组(46.89±3.88),明显增高(P<0.05),CD8表达分别为29.75±2.22、30.06±2.54,与EAE模型组(33.15±2.57)比较,无显著差异,致敏后17、25d,CD4表达水平有下降趋势.LMS同时给药组和LMS预处理组发病大鼠脊髓内单个核细胞表面CD4的表达水平分别为62.0±9.39、64.6±6.36,较EAE模型组(37.8±5.16),明显增高(P<0.01),而CD8的表达水平各组无明显变化.
(4)外周血及脊髓内炎症细胞表面B7-1/B7-2:CD28/CTLA-4协同刺激分子表达:抗原致敏后7d,LMS同时给药组和LMS预处理组外周血淋巴细胞表面CD28表达水平分别为6 3.51±6.19、62.18±6.93,较EAE模型组(55.95±3.60),明显增高(p<0.05),致敏后17、25d,CD28表达水平有下降趋势.而B7-1、B7-2、CTLA-4表达未见明显变化;LMS同时给药组和LMS预处理组发病大鼠脊髓内单个核细胞表面CD28的表达水平分别为25.4±6.05、31.3±7.03;较EAE模型组(14.4±2.55),明显增高(P<0.01).LMS同时给药组和LMS预处理组发病大鼠脊髓内单个核细胞表面B7-1/B7-2的表达水平分别为5.00±1.02/8.29±1.73、5.46±0.77/8.84±0.90,也较EAE模型组(2.24±0.14/3.93±0.51)增高(P<0.01).而CTLA-4的表达似有减少,但无统计学意义.
[结论] (1)在抗原致敏前及致敏同时给予LMS干预,均能加重EAE临床症状和病理改变.(2)LMS能够上调GPSCH致敏大鼠外周血淋巴细胞及脊髓单个核细胞CD4表达,加重CD4/CD8失衡.(3)LMS能够上调GPSCH致敏大鼠外周血淋巴细胞CD28的表达.(4)LMS能够上调EAE大鼠脊髓单个核细胞CD28/B7协同刺激分子的表达,通过协同刺激途径,进一步促使CD4<+>Th细胞活化,上调免疫应答,从而加重EAE.提示该病理生理现象可能是LMS对EAE加重和促发作用的重要机制之一(5)LMS直接致敏大鼠体重有下降趋势,有1/12只出现明显行为异常、易激惹,大脑可见到局灶性的炎细胞侵润,提示LMS可能对CNS炎症有激发作用.