禾谷丝核菌弱毒菌株中的真菌病毒研究

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真菌病毒(mycovirus)普遍存在于各类真菌中,并且能够在真菌体内进行有效复制。目前报道的真菌病毒主要分属于14个科以及一部分未分类真菌病毒,其基因组核酸类型包括dsRNA、(+)ssRNA、(-)ssRNA和ssDNA。大部分真菌病毒对宿主都没有显著的影响。近年来在多种植物病原真菌中发现的许多弱毒相关的真菌病毒,为真菌病害的生物防治提供了丰富的资源。丝核菌中的禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis Van der Hoeven)属于双核丝核菌的AG-D融合群,是引起我国小麦纹枯病的优势种群。研究发现R.cerealis一些菌株中的dsRNA存在丰富的多样性。但是由于大多数dsRNA对宿主没有明显的影响,目前对于丝核菌尤其是双核的禾谷丝核菌中的真菌病毒的研究还很少。根据对弱致病力菌株中提取的dsRNA高通量测序分析显示,在禾谷丝核菌中包含多种真菌病毒相关的序列。探索这些序列与弱毒菌株及其弱致病力之间的关系,明确其与真菌毒力衰退之间的关系,能够为发掘有生防潜力的病毒提供有价值的线索。本研究对采自我国山东的一株禾谷丝核菌弱致病力菌株R1084进行了研究。结合高通量测序结果,通过克隆测序和RACE方法获得了线粒体病毒Rhizoctonia cerealis mitovirus 1-R1084(RcMVl-R1084)的基因组序列并作 了初步分析。RcMV1-R1084全长 3149bp,G+C 含量 40.3%,5’UTR533nts,3’UTR 为 177nts,没有 poly(A)尾巴。无论使用真菌线粒体遗传密码还是通用密码子,RcMV1-R1084都编码一个相同的ORF,该ORF长度2439bp,编码812个氨基酸,分子量为91.27kDa,包含一个线粒体病毒的RdRp保守结构域。系统发育分析表明RcMV1-R1084的RdRp与Sclerotinia sclerotiorummitovirus 11相似度最高,具有50%的氨基酸序列相似度。这是真菌线粒体病毒在R.cerealis中的首次发现。对禾谷丝核菌弱致病力菌株R10125中两个病毒的部分基因组序列进行了验证,初步推断它们可能分别属于线粒体病毒(Mitovirus)和低毒病毒(Hypovirus),暂时命名为 RcMV2/R10125 和 RcHV1/R10125。其中 RcMV2/R10125 具有完整的 ORF 和一个RdRp保守结构域;与RcMV1-R1084的序列差异较大;而RcHV1/R10125还有可能比较长的一段基因组序列尚未获得。推测在R10125和R1084中可能存在多个线粒体病毒、低毒病毒以及其它病毒共同侵染同一菌株的情况,其中可能就包含具有毒力衰退相关的真菌病毒。对弱致病力菌株R1084和R10125毒力衰退的原因进行初步探索。分析了 R1084和R10125菌尖分离后代以及强致病力菌株R0301和中等致病力菌株R0959与R1084和R10125对峙培养后的一些生物学性状。结果表明R10125菌尖分离的后代菌株的菌落形态、菌丝形态,生长速率都明显恢复,对苗期小麦的致病力有一定程度的增强。R0959与R1084和R10125对峙培养后,菌落形态异常,菌丝细弱、弯曲,对苗期小麦致病力下降。但是R0301与R1084和R10125对峙培养后其菌落形态、生长速率及致病力等性状没有表现出明显变化。综合菌尖分离和对峙培养的结果,推测R10125及R1084中可能含有毒力衰退相关因子,但是还需要进一步明确。
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