白头翁总皂苷的生物转化及产物分离纯化

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本论文以制备低糖基的白头翁皂苷为目的,从中药白头翁中提取了白头翁总皂苷,并对部分白头翁皂苷单体进行了分离,然后采用生物转化法对白头翁总皂苷和单体皂苷进行了转化,并对总皂苷的酶解产物进行了分离纯化。首先制备了白头翁总皂苷。以白头翁为原料,采用乙醇浸提法提取,经AB-8大孔吸附树脂脱糖、D-296离子交换树脂脱色后得到总皂苷粗品的得率为7.71%;采用正丁醇萃取法脱糖脱色得到总皂苷粗品的得率为9.86%。为了研究生物转化法对含有多个糖基的白头翁皂苷的转化作用,对白头翁单体皂苷进行了分离,得到两种单体白头翁皂苷a和b,其中a未知,b为白头翁皂苷B4。从6种菌中对能产白头翁皂苷水解酶的菌种进行筛选,最终确定Absidia sp.POOr菌株为产酶菌种,该菌在12%的白头翁浸提物的诱导下,30℃、培养5天所得到的酶液活力最高。最适酶反应条件为:底物浓度0.2%,pH5,反应温度40℃,反应时间24h。为了了解白头翁皂苷水解酶对底物的水解作用,对该酶进行纯化,确定分子量为114.7kDa。该酶可水解样品a和白头翁皂苷B4,生成相应的产物样品c和白头翁皂苷A3。对酶解产物进行了制备。以50g白头翁总皂苷为底物,进行了酶转化,酶转化产物经AB-8和D-296脱糖脱色处理后,共得34.2g粗产物。采用硅胶柱层析法对白头翁总皂苷的酶解进行分离纯化,共制得3.61g样品e,得率为10.6%,纯度为98%;2.03g样品f,得率为5.97%,纯度为82%;5.10g含样品c和白头翁皂苷A3两种单体的混合物,经继续结晶、重结晶分离,得到0.63g样品c,纯度为99.41%,1.37g白头翁皂苷A3,纯度为93.01%。
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