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弓形虫是一种全球分布且广泛寄生于人体及动物有核细胞的专性寄生原虫,能引起人兽共患的弓形虫病。该病的人群感染极为普遍,多数属于隐性感染。孕妇孕期首次感染弓形虫后可导致早产、流产、胎儿发育畸形。弓形虫病也是一种常见的机会性寄生虫病,是导致免疫功能严重低下的患者如患有恶性肿瘤、施行器官移植、长期接受放射治疗、应用免疫抑制剂以及先天性、后天性免疫缺陷者如艾滋病患者死亡的一种重要原因。此外,由弓形虫引起的禽畜类疾病也给畜牧业造成了严重的经济损失。迄今尚无治疗弓形虫病的特效药物,因此研制安全有效的疫苗极为迫切。弓形虫生活史较复杂,抗原成分具有发育阶段的特异性或差异性。因此成功的弓形虫疫苗应针对多个特异性抗原,所产生的保护性免疫力需要针对生活史中一个以上的感染阶段。SAG1为弓形虫速殖子期特异的主要表面抗原之一,具有高度的免疫原性和免疫保护性,是弓形虫疫苗开发的主要抗原。MIC4是弓形虫微线体分泌的一种蛋白,主要协助虫体入侵宿主细胞,在弓形虫生活史的所有感染阶段中均有表达,具有高度的保守性和免疫原性。SAG1和MIC4在虫体入侵宿主的过程中相互促进,其相应的抗体可有效拮抗弓形虫感染。同时,为攻克核酸疫苗免疫效力低下的难题,我们选用霍乱毒素(Choleratoxin)A2/B亚单位(CTA2/B)的真核表达质粒作为基因佐剂,以增强弓形虫复合抗原基因SAG1-MIC4的免疫效果。霍乱毒素是目前常用的免疫佐剂,具有较强的粘膜免疫原性和粘膜免疫佐剂效应,能有效增强抗原蛋白的免疫原性,同时增强机体的免疫作用。CTA2/B是一种有效诱导Th2型(IgG,sIgA)细胞反应为主的免疫佐剂,是粘膜免疫的有效激活剂,故可增强DNA疫苗粘膜免疫的免疫效果。本研究首先利用PCR技术从弓形虫基因组中获取基因SAG1和MIC4以构建真核表达质粒pcDNA3.1-SAG1,pcDNA3.1-MIC4及复合质粒pcDNA3.1-SAG1-MIC4。通过转染Hela细胞,利用RT-PCR检测其正常转录及表达情况。最后利用构建好的质粒及佐剂pcDNA3.1-CTA2/B通过粘膜免疫的方式免疫小鼠,检测这些疫苗引起的体液免疫和细胞免疫指标。之后腹腔注射弓形虫速殖子以观察并研究其免疫保护性。结果正确的构建了三种表达载体,经RT-PCR证明各质粒在Hela细胞中得到正确的转录。检测的免疫指标证明这些质粒均能引起很好的免疫应答反应。弓形虫RH株攻击试验表明各疫苗对小鼠均有一定免疫保护性,且复合基因疫苗的免疫效果明显优于单基因疫苗,并且基因佐剂CTA2/B可以对该复合基因疫苗起到很好的免疫增强作用。上述结果为深入研究基因疫苗的实际应用打下了良好的基础。