肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN),又称生长分化因子8(Growth differentiation factor 8,GDF-8),是TGF-β超家族成员之一。MSTN是肌细胞生长发育的负调控因子,MSTN基因变异可引起动物的“双肌”性状,从而提高动物的产肉性能。CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的基因定点修饰技术,它有制作简单、成本低、作用效果高等特点。鸡胚体内直接注射法,即将基因编辑工具与投递载体(如脂质体、病毒等)注入到鸡胚体内,直接转染体内的PGC从而生产性腺嵌合体鸡胚,实现基因编辑鸡的制备。本研究探讨了采用不同开口位置,封口条件,注射部位对鸡胚存活率和孵化率的影响,并将腺病毒直接注射法和CRISPR/Cas9技术结合,选择鸡MSTN基因作为靶位点,设计gRNA对鸡胚中MSTN基因进行定点敲除,为腺病毒直接注射法制备肌肉抑制素基因敲除鸡奠定基础。采用不同的开口方式,封口条件,注射位置研究其对鸡胚存活率和孵化率的影响。采用赤道面开口,LSD-高弹性密封胶封口,外周静脉注射GFP腺病毒探究其在鸡胚不同位置的转染效率。结果显示采用赤道面开口、密封胶封口、外周静脉注射种蛋对其孵化率影响较低;GFP病毒在种蛋中的转染效率符合后续实验要求。将设计的gRNA腺病毒和CRSIPR/Cas9腺病毒共同转染到鸡胚成纤维细胞中,采用T7EI酶切法检测其切割效率。随后使用上文中优化的赤道面开口、LSD-高弹性密封胶封口、外周静脉注射将CRSIPR/Cas9腺病毒和gRNA腺病毒注射到鸡胚中,孵化12天后提取性腺DNA,通过PCR检测MSTN基因的敲除效率。结果显示使用腺病毒作为投递载体能获得高效的CRISPR基因编辑效,使用CRISPR腺病毒直接注射法能获得MSTN大片段基因敲除的性腺嵌合体鸡胚。