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目的:探讨慢病毒介导的RNA干扰沉默HMGA1基因表达对脑胶质瘤细胞株SHG-44放射敏感性的影响。
方法:将前期制备的HMGA1siRNA慢病毒质粒及阴性siRNA慢病毒质粒分别转染脑胶质瘤细胞株SHG-44,将细胞分为三组:转染组(转染HMGA1siRNA的细胞)、质粒对照组(转染阴性siRNA的细胞)和未转染组(未转染的细胞)。半定量RT-PCR和Western blotting检测RNA干扰后对细胞HMGA1基因表达的影响。使用6MV X线同时照射三组细胞后,克隆形成法检测各组细胞对X线的敏感性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率及细胞周期。
结果:RT-PCI和Western blotting显示转染组细胞存在HMGA1基因表达下调:HMGA1 mRNA的表达量转染组(0.11±0.02)明显低于质粒对照组(0.85±0.01)和未转染组(0.89±0.02);HMGA1蛋白的表达量转染组(0.18±0.02)明显低于质粒对照组(1.03±0.01)和未转染组(1.13±0.03)。转染组细胞较质粒对照组细胞和未转染组细胞对6 MV X线的敏感性增加,增敏比为1.62和1.73;转染组凋亡率(37.4±3.1)%显著高于质粒对照组(7.4±0.6)%和未转染组(6.1±0.5)%,(P<0.01);转染组细胞周期存在G0/G1期延迟(72.6%±2.4%)显著高于质粒对照组(47.2±2.0)%和未转染组(45.2±1.6)%,(P<0.01)。
结论:HMGA1siRNA能特异性下调脑胶质瘤细胞株SHG-44中HMGA1基因的表达;脑胶质瘤细胞在HMGA1基因表达下调后对X线的敏感性增加。