在过量合成核黄素的重组枯草芽孢杆菌中,糖分解代谢流在糖酵解途径(EMP)和磷酸戊糖途径(PP)的分配比例,影响细胞的核黄素合成速率、产量和得率。在枯草芽孢杆菌中,糖分解代谢通量在EMP途径和PP途径的分配比例大约为7比3;PP途径的代谢通量受到细胞生长速率的调控,在一定范围内与细胞生长速率呈正比关系。由枯草芽孢杆菌遗传特性所决定的糖分解代谢通量分布规律和调控方式,是进一步提高核黄素合成速率和得率的主要限制因素。对核黄素生产菌株的糖代谢途径及调控方式进行遗传改造,提高PP途径的代谢通量是进一步提高重组枯草芽孢杆菌的核黄素发酵能力的关键。本文利用基因工程方法,敲除了转酮酶和CcpA蛋白缺陷型的核黄素发酵菌株B. subtilis24A1 6-磷酸葡萄糖异构酶的编码基因pgi,构建了6-磷酸葡萄糖异构酶缺陷菌株B. subtilis24B/pMX45。摇瓶发酵显示,B. subtilis24B/pMX45不能利用葡萄糖作为唯一碳源生长,表明葡萄糖不能进入EMP途径,只能经PP途径分解。在发酵培养基中加入5%的果糖,能够恢复B. subtilis24B/pMX45的生长水平。在果糖和葡萄糖为混合碳源的发酵培养基上,提高葡萄糖的浓度对于提高核黄素的产量几乎没有作用;随着葡萄糖浓度提高,核黄素得率下降。实验结果说明,敲除pgi基因,虽然使葡萄糖只能进入PP途径,但并不能使PP途径的代谢通量随着葡萄糖浓度的提高而增大,PP途径的代谢通量受到其它的代谢调控机制的控制。在B. subtilis24B中,分别增加了PP途径的两个脱氢酶编码基因zwf和gndA的拷贝数,但是对菌体的生长和核黄素合成没有显著影响。