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本文通过采用聚合酶链式反应和酶联免疫的方法(PCR-ELISA法),以副溶血性弧菌的toxR基因和tdh基因为检测目标,对海产品中的副溶血性弧菌进行快速检测。在该方法的建立过程中,以副溶血性弧菌的标准菌株为研究对象开展实验。提取副溶血性弧菌的DNA作为模板,以其toxR基因和tdh基因为目的检测基因,分别设计了一对引物,并验证了引物的特异性。之后用生物素(Biotin)标记上游引物的5’端,地高辛(Digoxigenin)标记其下游引物的5’端。在以下条件:94℃预变性3min,94℃变性30s,53℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环,72℃终止延伸10min,进行PCR反应。生物素(Biotin)作为连接中介、地高辛(Digoxin)作为抗原物质标记到了PCR产物上。用酶联免疫(ELISA)方法检测PCR产物:把PCR产物稀释20倍,加入到链酶亲和素包被的96孔酶标板中,将PCR产物固定到酶标板,用过氧化物酶标记的抗地高辛抗体(Antidigoxigenin-detecting antibody Fab fragments)进行免疫反应,ABTS显色,检测其吸光值。用平板计数法计算原始菌液中副溶血性弧菌的浓度为1.06×108CFU/m L,取1m L提取DNA,将提取的DNA溶液依次10倍梯度稀释,作为模板检测,确定了本论文建立的PCR-ELISA检测方法的检出限为1.06×102 CFU/mL。在大连市各大菜市场采集了30份新鲜杂色蛤样品,分别用国标方法(GB4789.7-2013)、本文建立的PCR-ELISA方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法3种方法进行检测。PCR-ELISA方法检测出4份阳性样品,与国标方法(GB 4789.7-2013)和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的检测结果一致。表明PCR-ELISA方法在检测过程中准确、可靠。检出限与荧光定量PCR接近。在副溶血性弧菌的快速检测中具有广泛的应用前景。