目的:　　 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，就世界范围而言，年发病人数约120万，约50万妇女死于乳腺癌，其发病率以欧美最高、亚、非、拉美最低。目前我国尚没有全国性乳腺癌发病率确切统计数字，据上海市新近统计，该市乳腺癌发病率已从10年前的23/10万迅速上升到37.2/10万，从第七位跃居女性肿瘤发病率的首位。我国乳腺癌世界标化死亡率为3.77人，全国每年约有2万女性死于该病，占全部女性恶性肿瘤死亡的6～7％。近年来我国乳腺癌有加速上升的趋势，已经高于日本和韩国。　　 人类乳腺癌染色体8p位置常出现重排或远端缺失，而使8p12区域过度扩增。ZNF703基因被认为是8p12区域内的驱动基因，常伴随着8p12区域的过度扩增而过表达。先前研究认为，ZNF703基因是重要的乳腺癌潜在的癌基因，它通过发挥对靶基因的转录抑制作用，影响乳腺癌的病理，生理各个方面。本文通过RT-PCR、Western-blot和免疫组化的方法对71例乳腺癌组织及部分正常乳腺组织进行研究。我们发现ZNF703在乳腺癌组织中比正常乳腺组织中表达显著增强。并且ZNF703蛋白的表达与乳腺癌分子亚型，肿瘤大小，淋巴结转移，分期，乳腺癌患者术后无病生存期显著相关。我们的数据提示ZNF703可能在预测乳腺癌进程和预后方面发挥重要作用。进一步的研究将探讨ZNF703是否可以作为乳腺癌新的治疗靶点。　　 本实验拟采用蛋白印迹试验方法（Western-blot），逆转录聚合酶链式反应方法(RT-PCR)和免疫组织化学方法(IHC)检测乳腺癌组织及正常乳腺组织标本，观察在癌组织与正常组织中ZNF703的表达，并结合临床病理资料分析其临床意义及与患者预后的关系。　　 材料和方法:　　 一、标本与材料　　 随机抽取2007年至2008年期间中国医科大学附属第四医院乳腺外科手术切除的乳腺癌组织71例，正常乳腺组织29例(距癌组织边缘≥3cm)。　　 ZNF703和GAPDH引物由大连Takara生物公司设计并合成，RT-PCR试剂盒购自Takara公司。Western-blot用羊抗人ZNF703抗体购自英国Abcam公司(ab40861)，鼠抗羊二抗购自中杉金桥公司。免疫组化用兔抗人ZNF703抗体购自美国sigma公司(HPA023930)，Alpha-Tubulin小鼠源单克隆抗体(E021030)购自美国EarthOx公司，兔抗鼠二抗购于中杉金桥公司，免疫组化用SP超敏试剂盒购自于福建迈新公司(KIT-9709)。　　 二、方法　　 （一）蛋白印迹试验(Western-blot)　　 冰冻组织标本块裂解并超声匀浆，低温超速离心，BCA法测定蛋白浓度，10％ SDS—PAGE凝胶电泳后转印，一抗(1∶500)4℃孵育过夜，碱性磷酸酶标记二抗(1∶3000)室温下孵育2h，ECL法曝光成像。应用Image J软件测量灰度值。　　 （二）逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)　　 RNA-Plus提取总RNA，逆转录反应按Takara试剂盒说明书操作，选择GAPDH作为内参照质控指标，扩增条件与ZNF703相同。1％琼脂糖凝胶进行电泳，紫外扫描成像。应用Image J软件测量灰度值。　　 （三）免疫组织化学(IHC)　　 手术切除的乳腺癌组织标本在甲醛中固定，石蜡包埋，3μm连续切片。二甲苯和梯度乙醇脱蜡后，置于0.1mol/L的柠檬酸缓冲液(PH=6.0)高压锅沸腾2.5min。根据SP试剂盒说明书滴加A液和B液，滴加一抗(1∶50)4℃过夜，次日按说明书滴加C液和D液。DAB显色后苏木素复染。梯度乙醇和二甲苯后中性树脂封片。结果由两个观察者按照独立、双盲的原则分别对切片进行结果判定。ZNF703的染色强度分为0(no signal),1(weak),2(moderate),3(marked)。　　 （四）随访方式和随访内容　　 本研究针对入组的71例乳腺癌病人进行术后电话随访，随访内容为每个病人的术后无瘤生存时间和总生存时间。　　 （五）统计学方法　　 用SPSS17.0统计软件进行统计分析。配对样本t检验分析ZNF703在乳腺癌组织和正常乳腺组织中的表达差异。Pearson卡方或Fisher确切概率法分析ZNF703的表达与不同病理分型、性别、年龄、TNM病理分期、是否有淋巴结转移等临床资料的关系。Kaplan-Meier预后分析判定患者预后。P＜0.05认为统计学意义。　　 结果:　　 （一）Western-blot结果　　 对29例乳腺癌组织及其对应正常乳腺组织进行检测，应用配对样本t检验对实验数据进行统计分析，结果提示ZNF703基因的蛋白在乳腺癌组织中比正常乳腺组织中显著高表达。　　 （二）RT-PCR结果　　 对29例乳腺癌组织及其对应正常乳腺组织进行检测，应用配对样本t检验对实验数据进行统计分析，提示ZNF703基因的mRNA在乳腺癌组织中的表达显著高于正常乳腺组织。　　 （三）随访率和随访结果　　 71例乳腺癌病人随访时间最短12个月，最长60个月，随访率100％。随访结果提示乳腺癌术后2年无瘤生存率88.7％，5年无瘤生存率73.2％，平均无瘤生存期51个月;术后2年的总生存率为94.4％，5年的总生存率为80.3％，平均总生存期55.4个月。　　 （四）IHC结果及其与临床病理资料和预后的关系　　 ZNF703蛋白主要定位在上皮细胞核内，在胞浆内有少量表达，在间质细胞内无表达。ZNF703蛋白在14/23例luminal B型乳腺癌组织中高表达，在15/48例非luminal B型乳腺癌组织中高表达，在1/21例正常乳腺组织高表达。ZNF703的表达与乳腺癌肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期相关，与年龄、绝经与否以及ER、PR、HER2、Ki67的表达无显著关系。Kaplan-Meier生存分析提示:在71例各类乳腺癌组织中，ZNF703蛋白低表达的病例组的无病生存期比ZNF703蛋白高表达组显著延长。单因素Cox回归分析提示TNM分期，淋巴结转移和ZNF703蛋白表达与无瘤生存期相关。多因素Cox回归分析仅提示TNM分期与无瘤生存期相关。　　 结论:　　 ZNF703基因在乳腺癌中的mRNA水平和蛋白水平均呈高表达，并且在luminalB型乳腺癌中表达上调更加显著。同时ZNF703的表达与乳腺癌肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期情况以及患者无瘤生存期相关。