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目的探讨肝脏特异性敲除YAP基因对胰岛素抵抗诱发的肝纤维化是否具有保护作用,并初步揭示其机制。方法将2个月龄的肝脏特异性敲除YAP基因(L-YKO)小鼠及对照小鼠(CNTR)各20只,随机分为CNTR、L-YKO、CNTR+HFD、L-YKO+HFD四组:其中CNTR+HFD和L-YKO+HFD两组分别给予60%高脂饲料(HFD)4个月诱发胰岛素抵抗(IR),CNTR和L-YKO两组分别给予普通维持饲料相同时间;分别检测体重、空腹血糖和随机血糖后,麻醉状态下处死动物,取肝脏称重并留取样本,取血清并检测肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;HE染色观察肝脏病理形态学变化;Masson染色观察肝脏纤维化分布;通过Western-blot方法和(或)Real-Time PCR方法分别检测肝组织中细胞外基质蛋白(ECM)、纤维化相关基因、YAP信号通路和胰岛素信号通路IRS1/2→Akt→FoxO1在蛋白和mRNA水平的表达。结果1 HFD刺激4个月后,与CNTR小鼠相比,CNTR+HFD小鼠表现出:(1)体重和肝重显著增加;(2)小鼠血清中ALT和AST含量明显增加,肝功能受损;(3)HE与Masson染色检测结果显示,小鼠肝细胞发生肿胀、细胞间连接松散,视野内可见大小不一的脂滴,肝脏出现纤维化;(4)小鼠空腹和随机血糖都显著升高,糖耐受和胰岛素耐受能力均下降;(5)肝脏糖原合成基因如G6pase明显升高,肝脏参与葡萄糖转运的Glut2基因表达增高,提示肝脏糖代谢异常;(6)小鼠肝脏中细胞外基质蛋白Collagen1表达明显增加。尽管促进ECM降解的MMP9表达增高,但MMP2表达显著减低;(7)代表肝星状细胞激活的标志性基因α-SMA在蛋白和基因水平均明显增加,提示肝星状细胞已被激活。另外参与纤维化的重要因子TGF-β1也在蛋白和基因水平均明显增多;(8)在小鼠肝脏胰岛素信号通路IRS1/2→Akt→FoxO1增强:IRS2的表达减低,p-FoxO1/FoxO1比值明显减小,表明FoxO1的去磷酸化增加而被激活;(9)小鼠YAP信号通路的靶基因Ankrd1的表达显著升高。这些结果表明:高脂饮食刺激后,导致IR,糖代谢异常,肝脏出现纤维化,肝功能受损,胰岛素信号通路被削弱,FoxO1被激活,且YAP的靶基因Ankrd1被上调。2在肝脏特异性敲除YAP后,与CNTR小鼠相比,L-YKO小鼠肝脏的FoxO1与TGF-β1基因在蛋白水平都显著降低。表明:肝脏YAP基因敲除,可以抑制TGF-β1和FoxO1的表达。3 HFD刺激4个月后,与CNTR+HFD小鼠相比,L-YKO+HFD小鼠表现出:(1)体重与肝重明显降低;(2)小鼠血清中ALT和AST含量显著下降;(3)小鼠空腹和随机血糖均显著降低,糖耐受和胰岛素耐受能力均提高;(4)HE与Masson染色显示,小鼠肝细胞肿胀明显减轻,细胞间连接松散状况有较好改善,脂滴明显减少,纤维化程度降低;(5)肝脏糖原合成基因如Pepck和G6pase明显降低,Glut4基因表达增高,提示肝脏糖代谢能力有所恢复;(6)L-YKO+HFD小鼠肝脏中ECM如Collagen1表达显著降低;促进ECM降解的MMP2和MMP9的表达升高;(7)YAP信号通路减弱;TGF-β1、α-SMA在蛋白水平的表达均下降;(8)YAP的靶基因Ankrd1进一步被抑制;(9)肝脏FoxO1被抑制。表明:肝脏敲除YAP基因后,可改善IR诱发的肝纤维化和肝功能损伤,抑制肝星状细胞的激活,其机制与抑制TGF-β1和FoxO1有关。结论肝脏敲除YAP基因对胰岛素抵抗诱发的肝纤维化和肝功能损伤具有保护作用,其机制与抑制TGF-β1和FoxO1的活性有关。图36幅;表6个;参122篇。