雪莲果叶中酚酸的分离鉴定及其生物活性研究

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本文以云南丰富的雪莲果叶为材料,对雪莲果叶的化学成分,雪莲果叶中酚酸的提取进行了研究,采用大孔树脂柱层析法对雪莲果叶粗提物进行了分离纯化,确定了雪莲果叶中酚酸的最佳提取和分离纯化的条件,对雪莲果叶酚酸中绿原酸进行了分离鉴定,研究了雪莲果叶酚酸抗氧化活性和抑菌能力,主要研究结果如下:1.雪莲果叶的化学成分及矿物元素组成研究雪莲果叶中含24.89%的总糖,18.75%的粗纤维,16.35%的蛋白质,11.37%的水分,5.10%的脂肪和9.14%的灰分,此外还含有P、Ca、Mn、Mg、Fe等多种矿物质元素。2.雪莲果叶中酚酸的提取工艺研究采用乙醇回流法研究了雪莲果叶中酚酸的提取工艺,通过溶剂对比实验和单因素实验确定了从雪莲果叶中提取酚酸的最佳提取溶剂及影响提取率的主要因素,并通过正交实验优化了提取条件,得到了从雪莲果叶中提取酚酸的最佳工艺条件:用乙醇30%提取,料液比为1:40,在95℃预处理15min,,提取温度为70℃,浸提1h,提取2次,在此条件下酚酸提取量为32.92 mg/g。3.雪莲果叶中酚酸的分离纯化研究筛选出X-5型大孔吸附树脂用于分离纯化雪莲果叶酚酸,最佳分离条件为:进样液酚酸含量低于1.384 mg/mL,pH为3,流速为1.0 mL/min下进行吸附,用50%乙醇以1.0 mL/min的流速进行洗脱,得到纯度为46.8%的雪莲果叶酚酸,用乙酸乙酯进一步纯化可提高纯度至82.53%。4.雪莲果叶中酚酸中绿原酸的鉴定研究利用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)技术分离出雪莲果叶中含有绿原酸。TLC以硅胶G为固定相,以乙酸乙酯-水-甲酸-甲苯(85:10:10:4,V:V:V)为流动相,绿原酸为对照品,用2%FeCl3-1%K3Fe(CN)6为显色剂,分离鉴定出雪莲果叶中酚酸含有绿原酸成分。利用HPLC对雪莲果叶酚酸进行了分析,建立了HPLC测定雪莲果叶中绿原酸的方法。色谱条件为:色谱柱为Hypersil ODS2 C18柱(4.6mm×300mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%磷酸水溶液(8:92,V:V),检测波长为325nm,流速为1.0 mL/min,柱温为25℃。雪莲果叶中的绿原酸含量为0.494 mg/g。5.雪莲果叶酚酸的生物活性探讨雪莲果叶酚酸提取物对·OH、O2-·和DPPH自由基有一定的清除作用,清除自由基的效果与样品浓度存在一定的量效关系。雪莲果叶酚酸对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌均有良好抑制生长作用,对于供试的三种菌中,雪莲果叶酚酸对金黄色葡萄球菌抑制作用最强。
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