论文部分内容阅读
目的通过IL-1β诱导兔原代软骨细胞，模拟OA时软骨细胞所处的病理环境，观察川芎嗪对兔原代软骨细胞的活力及iNOS、NO的表达差异，探讨川芎嗪对IL-1β诱导软骨细胞增殖与凋亡的影响，为川芎嗪应用于临床防治骨性关节炎软骨的进行性退变提供实验与理论依据。方法1.实验分组：对照组、IL-1β10ng/ml组、IL-1β10ng/ml+TMP5ug/ml组、IL-1β10ng/ml+TMP10ug/ml组、IL-1β10ng/ml+TMP15ug/ml组及IL-1β10ng/ml+TMP20ug/ml组。2．应用机械-酶联消化法取软骨细胞，构建体外原代软骨细胞培养体系，进行软骨细胞鉴定。3．用IL-1β10ng/ml和/或不同浓度川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48h后,用流式细胞仪检测软骨细胞生长周期及凋亡率；用MTT法检分别24h、48h及72h的软骨细胞的生长活力；4．实验分组处理48h后用RT-PCR和免疫组化检测iNOS基因及蛋白表达；用硝酸还原法检测细胞培养上清液NO的表达。结果1.镜下软骨细胞贴壁后变形呈三角形或多角形，有明显突起，核仁明显。甲苯胺蓝染色于胞质中可见蛋白多糖异染为蓝紫色颗粒，胞浆有红色Ⅱ型胶原荧光表达，少见于胞核。2.用IL-1β10ng/ml和/或不同浓度(5,10,15,20ug/ml)川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48h后,与对照组比较，IL-1β诱导下软骨细胞被明显阻滞在G1期，并且生长活力明显下降(P<0.01)；加入川芎嗪能明显降低IL-1β对软骨细胞G1期的阻滞作用，细胞增殖指数、细胞活力明显增加（P<0.05或P<0.01）。3.用IL-1β10ng/ml和/或不同浓度(5,10,15,20ug/ml)川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48h后，与对照组比较，IL-1β诱导下软骨细胞的凋亡率显著增加，明显上调软骨细胞iNOS和NO的表达，均具有显著统计学意义(P<0.01)，IL-1β和川芎嗪联合作用，川芎嗪能明显抑制IL-1β诱导软骨细胞的凋亡及iNOS、NO的表达（P<0.05或P<0.01）。结论1.川芎嗪能增加IL-1β诱导的兔原代软骨细胞的增殖，与增加细胞增殖指数（S+G2百分比）及减少细胞G1的百分比有关，从而促进细胞生长。2.川芎嗪能有效抑制IL-1β诱导兔软骨细胞凋亡，减少iNOS的表达和NO的合成。