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目的：观察中医补肾填精法治疗卵巢早衰(Premature ovarian failure, POF)的疗效,探讨卵巢早衰的治疗及预防。研究补肾填精中药对免疫性卵巢早衰小鼠卵巢生长分化因子-9(Growth and differentiation factor-9, GDF-9)信号转导的影响,进一步阐释补肾填精法治疗免疫性卵巢早衰的机制。方法：临床研究部分收集2011年11月至2014年3月在广州中医药大学第一附属医院妇科门诊就诊、符合卵巢早衰诊断标准的患者25例,其中11例患者单纯用补肾填精法治疗,其余14例患者使用中医补肾填精法结合西医雌孕激素治疗,连续治疗6个月。同时选取21例卵巢储备功能下降的患者作为对照组,用补肾填精法治疗6个月,观察治疗前后血清卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone, FSH)、黄体生成素(Luteinizing hormone, LH)、雌二醇(Estraiol, E2)水平变化及主要临床症状改善情况。实验研究部分选取BALB/C8周龄的雌性小鼠84只,随机分为7组：POF模型4周组、POF模型8周组、左归丸4周组、左归丸8周组、已烯雌酚4周组、已烯雌酚8周组、空白对照组。用小鼠透明带3多肽(Zona Pellucida3, ZP3)腹腔及皮下多点注射双后脚掌免疫小鼠(免疫剂量为0.15ml,其中含0.03mg的ZP3)建立免疫性卵巢早衰动物模型,空白组予同等量的蒸馏水。造模成功后,药物组分别用左归丸及已烯雌酚进行灌胃治疗,空白组及模型组予同等量的蒸馏水,连续灌胃4周或8周,并在相应时间段取小鼠卵巢组织。Western blot法检测卵巢组织中GDF-9. Smad2蛋白的表达。结果：1.25例POF女性发病年龄主要集中在26-30岁年龄阶段,占40%,20-25岁年龄阶段所占比例最低,为16%。2.25例POF女性平素性情急躁易怒者占64%,平素性情抑郁多虑者占28%；21例DOR女性平素性情急躁易怒者占52.4%,平素性情抑郁多虑者占42.9%。3.25例POF患者中月经停闭6个月及其以上(闭经)的有15例,占60%,月经停闭4-6个月内(月经后期)的有10例,占40%。经补肾填精法治疗后,闭经及月经后期积分与治疗前相比差异显著,有统计学意义(P<0.05),月经改善的总有效率为64%。4.POF患者主要临床症状表现为心烦易怒、失眠、潮热汗出、性交痛、肌肉关节痛。经补肾填精中药治疗后,主要症状出现频数减少,潮热汗出、心烦易怒、抑郁不乐、失眠等症状明显改善,症状积分与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)。5.POF患者经补肾填精中药治疗后血清FSH水平下降显著,治疗前后差异有统计学意义(P<0.05)；LH水平经治疗后虽有下降,但治疗前后差异无统计学意义；E2水平经治疗后虽有升高,但治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。6.卵巢早衰模型组小鼠的阴道脱落细胞涂片主要表现为大量白细胞及少量的上皮细胞,以动情间期为主。POF组小鼠卵巢组织中GDF-9蛋白及其信号转导蛋白Smad2表达较空白组降低(P<0.05)。7.左归丸组小鼠动情间期稍延长。左归丸组小鼠卵巢组织中GDF-9蛋白及其信号转导蛋白Smad2表达较模型组升高(P<0.05)。结论：1.POF的致病因素与情志因素密切相关,同时也与饮食不节、劳逸失常、房劳多产、盆腔手术等因素有关。2.补肾填精法治疗POF具有一定的疗效,可改善月经状况及临床症状,能降低患者高血清FSH、LH水平,升高低E2水平,并可及早干预DOR病情进展。3.免疫性卵巢早衰的发生可能与卵巢组织中的GDF-9蛋白表达下降有关,并可能通过影响GDF-9/Smad2信号转导通路,导致卵泡生长发育障碍、卵泡加速耗竭、卵泡闭锁加快,引起卵巢早衰。4.补肾填精中药左归丸可上调POF小鼠卵巢GDF-9蛋白的表达,可能通过调控GDF-9/Smad2信号转导发挥对卵泡的调节作用,从而达到促进卵泡发育、改善卵巢功能的作用。