叠鞘石斛多糖的提取分离及生物活性研究

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随着生活水平的提升,人们越来越注重身心双方面的需求。对于现代园林景观,人们已不再仅仅满足于其游憩和观赏的功能,保健型园林逐渐契合人们增长的需求,这也促进了“园艺疗法”的兴起。“园艺疗法”为风景园林设计提供了新思路,园林植物是“园艺疗法”的主体,植物中所含的次生代谢产物是“园艺疗法”的物质基础。具有药用价值的园林植物成为“园艺疗法”的首选,而具有观赏性的药用植物也将会更多地被应用到园林景观的设计中。园林植物仅做观赏应用较为单一,研究园林植物的药用价值能使其在满足园林景观的应用之余展现出更多的应用价值,使资源能得到更加充分的利用,为建设功能性园林景观提供思路。叠鞘石斛(Dendrobium denneanum Kerr.)为兰科石斛属植物,花多颜色鲜艳,花姿优美,观赏性极高。本试验以叠鞘石斛为原材料,从中分离提取出多糖物质并对其结构特征、体外抗氧化活性和其对巨噬细胞免疫活性的影响进行初步研究。采用水提醇沉和碱提醇沉两种方法各获得3个不同分子量的粗多糖,经透析获得较为纯净的6个多糖样品。采用高效凝胶色谱分析叠鞘石斛6个多糖样本的分子量,测得ddp1-1分子量为6.87×103Da,ddp1-2分子量为8.80×104 Da,ddp1-3分子量为2.45×105 Da,ddp40分子量为1.70×105 Da,ddp60分子量为5.78×104 Da,ddp80分子量为1.36×104 Da。红外光谱结果显示叠鞘石斛6个多糖都具有典型的多糖特征峰。ddp1-1的组成单糖基为吡喃糖,为α-构型的糖;ddp1-2的组成单糖基为呋喃糖,为β-构型的糖;ddp1-3的组成单糖基为吡喃糖,为β-构型的糖;ddp40的组成单糖基为吡喃糖,为α-构型的糖;ddp60的组成单糖基为吡喃糖,为α-构型的糖;ddp80的组成单糖基为吡喃糖。通过对ABTS、DPPH和羟自由基的清除能力以及还原能力的试验,发现各样品的抗氧化能力均具有剂量依赖性。体外抗氧化实验显示,ddp80的还原能力最强,IC50为11.566mg/mL;ddp80在浓度为80 mg/mL时对ABTS自由基的清除率达到88.23%,IC50为23.59mg/mL;ddp80在浓度为160mg/mL时对DPPH自由基的清除率达到100%,IC50为23.754mg/mL;ddp80在浓度为320mg/mL时对羟自由基的清除力达到139.55U/mL。通过对RAW264.7细胞增殖和吞噬能力影响的试验,发现各多糖样品均能有效提高其增殖能力和吞噬能力,在一定的浓度范围内呈现出剂量依赖性。通过分析RAW264.7细胞培养上清液中各细胞因子含量的变化,研究了叠鞘石斛多糖对巨噬细胞免疫活性的影响。结果显示:在浓度为200μg/mL时,ddp80能明显促进RAW264.7细胞中TNF-α因子的产生;ddp1-2、ddp1-3和ddp40能促进RAW264.7细胞中IL-1β因子的产生,其中ddp1-3和ddp40的促进作用更为明显;ddp1-2和ddp80能促进RAW264.7细胞中IL-6因子的产生。由本研究可知,叠鞘石斛6个多糖样品均具有一定的生物活性,其中ddp80表现尤佳,可增强细胞免疫性,具有抗肿瘤潜力。
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