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孕激素(Progestin)是一种重要的性激素,雌性动物主要在卵巢合成,雄性动物在睾丸和肾上腺皮质合成,其生物学功能已在生殖功能范围内被广泛研究,可促进雌(女)性附性器官成熟及第二性征出现,并维持正常性欲及生殖功能。近年来,雌、孕激素与神经系统疾病的关系日益受到人们的重视。已有研究报道,孕激素可以对多种实验模型,比如模拟某些致病因素导致的脑功能障碍和与年龄相关的神经退行性疾病—阿尔茨海默氏病模型发挥神经保护作用,孕激素还可以保护原代培养的海马细胞免受硫酸亚铁和β-淀粉样蛋白的毒性影响。已有研究通过免疫组织化学SP法在雌性山羊交感神经节的腹腔肠系膜前神经节和肠系膜后神经节内的神经元中发现有孕激素受体的存在,提示交感神经节上的孕激素受体可能是孕激素对内脏器官内分泌调节和自主神经对其支配的相应内脏器官的神经调节之间相互协调作用的网络节点,但孕激素对交感节后神经元具体产生了什么样的作用目前尚不清楚。本研究采用免疫组织化学SP法检测仔兔及成年家兔颈前神经节内孕激素受体(PR)的分布特点;在神经元贴壁后添加不同浓度的孕酮,采用MTT法检测孕酮对培养的交感节后神经元活性的影响;用Ca2+荧光指示剂在激光共聚焦显微镜下动态监测培养神经元胞质内Ca2+浓度的变化,结果发现:1.运用免疫组织化学SP染色法,发现在仔兔及成年兔颈前神经节中孕激素受体主要在神经元内表达,提示颈前神经节具备接受孕激素调节的条件。2.初步建立了仔兔交感节后神经元的培养体系,经神经元特异性标记物(鼠抗人beta-tubulin Ⅲ)细胞免疫组织化学染色,神经元及突起均显示强阳性,证明仔兔交感节后神经元培养成功;经孕激素受体多克隆抗体细胞免疫组织化学染色,发现仔兔交感节后神经元呈强阳性表达,神经胶质细胞及突起呈弱阳性,提示仔兔交感节后神经元是孕激素作用的靶细胞。3.用三个浓度的孕酮处理交感节后神经元的培养体系,每隔6h检测其活性,发现所测三个浓度的孕酮作用6h后,实验组OD值与对照组相相比无显著性影响;作用12h后,20ng/mL组OD值显著高于对照组,而60ng/mL和100ng/mL组不存在显著性差异;18h后,三个实验组的OD值都显著低于对照组;24h后,100ng/mL组的OD值显著性低于对照组,其他两个浓度的则无显著性影响。提示20ng/mL的孕酮作用12h可增强交感节后神经元培养体系的活性,其他组则抑制其活性或无显著性影响。4.激光共聚焦显微镜下动态监测不同浓度孕酮处理后神经元胞质内Ca2+浓度变化,发现对照组对胞质内Ca2+浓度无显著性影响;20ng/mL和40ng/mL的孕酮可显著性增加胞质内Ca2+浓度,接着60ng/mL和80ng/mL的孕酮处理,胞质Ca2+浓度不再继续增加;在60ng/mL孕酮处理时,发现胞质内Ca2+浓度有个显著的瞬时升高,然后迅速回到原来水平。