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目的：细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-induced killer cells,CIK细胞)是在体外由多种细胞因子诱导外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclearcell,PBMC)而生成的一群异质细胞。CIK细胞增殖速度快，杀瘤谱广，已经成为过继细胞免疫治疗的主要方法之一。CIK细胞可清除肿瘤患者体内的微转移灶，减少术后的复发率，因此，提高CIK细胞疗效对肿瘤患者的治疗有着重要意义。调节性T细胞(Regulatory T cell，Treg细胞)是具有免疫负调节作用的T细胞亚群之一，可抑制免疫活性细胞的活化和增殖，是影响细胞免疫治疗的一个因素。Treg细胞可抑制肺癌患者、胰腺癌患者CIK细胞的抗肿瘤能力，而对肝癌患者CIK细胞疗效的影响目前尚未见报道。IL-6是一种多功能的细胞因子，有研究表明可降低Treg细胞水平。目前，临床中获取足量的免疫活性细胞存在困难，而IL-6可作为T细胞的第二刺激信号增加T细胞增殖的能力。本研究主要探讨IL-6对CIK细胞在体外增殖能力、细胞因子分泌功能和杀伤靶细胞功能的影响，为进一步提高CIK细胞的治疗效果提供参考。
方法：⑴CIK细胞的体外制备：采取外周血单个核细胞，第一天加入IFN-γ，第二天加入IL-2、IL-1α、CD3McAb多种细胞因子，为CIK组即对照组；第一天加入IFN-γ、IL-6，第二天加入IL-2、IL-1α、CD3MeAb多种细胞因子，为IL-6-CIK组即实验组。以后根据细胞生长情况换新鲜培养液，对照组同时加入IL-2，而实验组同时加入IL-2和IL-6，在体外培养14天。⑵CIK细胞的表型特性和细胞因子分泌：在CIK细胞培养的第14天，用流式细胞仪对CIK细胞进行表型特征的分析和检测细胞因子IFN-γ、IL-17的分泌情况。⑶CIK细胞体外杀伤活性：在CIK细胞培养的第14天，以肝癌细胞系7721为靶细胞，用LDH酶释放法检测CIK细胞对肝癌细胞的体外杀伤能力。⑷CIK细胞的增殖能力：在CIK细胞培养的第7天，用流式细胞仪检测CFSE标记的CIK细胞的增殖反应。
结果：①在CIK细胞培养的第14天，用流式细胞仪检测其表型分布情况。结果显示：与PBMC相比，CIK细胞中CD3+细胞的比例升高，由培养前的61.11±11.01上升到91.89±.2.76，差别有统计学意义(P＜0.001)。与PBMC相比，CIK细胞中CD3+CD4+细胞的比例降低，由培养前的29.33±6.45下降到13.93±8.57，差别有统计学意义(P＜0.001)。CD3+CD8+细胞的比例由培养前的14.97±7.64上升到61.90±13.57，差别有统计学意义(P＜0.001)。CD3+CD56+细胞的比例与PBMC相比明显升高，其值分别为8.25±4.09和3.53±2.48，差别有统计学意义(P＜0.001)。与PBMC相比，CIK细胞中Th17/CD4+细胞的比例升高，由培养前的0.87±0.47上升到2.12±1.31，差别有统计学意义(P＜0.001)。与PBMC相比，CIK细胞中Treg/CD4+细胞的比例降低，由培养前的9.09±2.087下降到6.20±2.85，差别有统计学意义(P＜0.001)。②在CIK细胞培养的第14天，用流式细胞仪检测其表型分布情况。结果显示：IL-6-CIK组与CIK组中CD3+CD4+细胞的比例分别为15.29±9.06和13.93±8.57，前者的比例高于后者，差别有统计学意义(P＜0.05)。IL-6-CIK组与CIK组中CD3+CD8+细胞的比例分别为53.24±14.16和61.90±13.57，前者的比例低于后者，差别有统计学意义(P＜0.001)。IL-6-CIK组与CIK组中Treg/CD4+细胞的比例分别为4.65±1.83和6.20±2.85，前者的比例低于后者，差别有统计学意义(P＜0.05)。③CIK细胞培养的第7天，用流式细胞仪检测CFSE标记的CIK细胞，结果显示：CIK组的增殖能力：79.07±8.14％，而IL-6-CIK组的增殖能力：85.51±5.44％，差别有统计学意义(P＜0.001)。④在培养的第14天，用流式细胞仪检测CIK细胞内细胞因子的分泌。结果显示：PBMC和CIK组细胞中IFN-γ+细胞的比例分别为18.56±9.96、53.05±12.16，后者高于前者，两者差别有统计学意义(P＜0.001)。CIK组与IL-6-CIK组中IFN-γ+细胞的比例为53.05±12.16、49.26±10.17，前者高于后者，差别有统计学意义(P＜0.001)。⑤在CIK细胞培养的第14天，用LDH酶释放法检测其对肝癌细胞的体外杀伤能力。结果显示：与PBMC对照相比较，CIK组在体外对肝癌细胞系7721的杀伤能力增强(P＜0.001)。与CIK组相比，IL-6-CIK组在靶效细胞比为60∶1、30∶1、10∶1时对肝癌细胞癌7721的杀伤能力明显提高，差异有统计学意义(P＜0.001、P=0
结论：⑴与PBMC相比，CIK细胞中Treg/CD4+细胞的比例降低，而Th17/CD4+细胞的比例升高；⑵IL-6可提高CIK细胞的增殖能力，降低Treg细胞水平，提高CIK细胞在体外对肝癌细胞的杀伤能力。