【摘 要】
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诱导多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPS cells)是成体细胞在外源因子作用下,经直接细胞核程序重整而重新获取多潜能性的干细胞。iPS细胞在应用上规避了伦理和
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诱导多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPS cells)是成体细胞在外源因子作用下,经直接细胞核程序重整而重新获取多潜能性的干细胞。iPS细胞在应用上规避了伦理和免疫排斥问题,其在疾病模型建立与机理研究、细胞治疗等方面极具应用价值。iPS细胞在疾病模型研究上已取得重大成果。然而,iPS细胞的研究面临重编程效率低和成瘤风险两大挑战。在本课题中,应用慢病毒作为载体,携带Oct4、Sox2、Nanog、Lin28基因重编程人肝癌细胞系Huh7为多潜能干细胞样的细胞。人肝癌细胞系Huh7细胞是可在体外永生化生长的一种人肝癌细胞系。在本课题中Huh7细胞被重编程后,在形态学、免疫组织化学、碱性磷酸酶检测以及RT-PCR等方法检测其是否具有或部分具有多潜能性。实验结果表明,Huh7细胞被重编程为多潜能干细胞样细胞,碱性磷酸酶染色呈阳性,免疫荧光实验证明其表达多潜能因子,Oct4与TRA-1-60,qPCR实验证明其高水平表达内源性的多潜能相关基因及干细胞特异的microRNAs,体内分化实验结果表明iHuh7可以形成畸胎瘤。由此我们得出的结论是,通过携带四种多潜能因子的慢病毒介导的重编程,Huh7细胞可以被诱导为多潜能干细胞样细胞。这项技术为研究人肿瘤细胞系和肿瘤原代组织细胞的重编程技术的改进以及肝癌iPS细胞模型的初步建立打下了基础。
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