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皮肤衰老(Skin aging)是人体最常见的老化现象,临床表现为皮肤干燥、变薄、皱纹增多等,直接影响人的外观和健康,诱发一系列的心理与社会问题。因此,预防和延缓皮肤衰老成为当今医学研究的热点与焦点之一。目前关于皮肤衰老的发病机制尚不明确,治疗手段与方法亦不成熟,因而需要深入探讨其发病的分子机制,为延缓皮肤衰老药物的研发提供实验依据。目的：1.研究核桃仁水提物对皮肤老化小鼠皮肤病理形态、厚度和含水量的影响。探讨核桃仁水提物对皮肤老化小鼠皮肤胶原纤维的影响。2.研究核桃仁水提物对皮肤老化小鼠皮肤细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响。方法：1.采用5%D-半乳糖(D-gal)颈背皮下注射和紫外线(UV)照射联合建立衰老小鼠模型,并连续灌胃核桃仁水提物(WWE)30d。运用肉眼观察、HE染色、皮肤厚度及含水量测定方法观察核桃仁提取物对皮肤老化小鼠皮肤病理形态结构的影响。2.利用Masson三色染色法观察皮肤胶原纤维形态变化,用生化法测定皮肤组织中羟脯氨酸(Hyp)含量,免疫组织化学染色和Western Bloting方法检测核桃仁水提物对皮肤老化小鼠皮肤细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)表达的影响。3.免疫组织化学、免疫荧光方法以及Western Bloting技术检测核桃仁水提物对皮肤老化小鼠皮肤细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3凋亡蛋白表达的影响。结果：1.D-半乳糖颈背皮下注射联合UV照射40天后,与正常组相比,模型组小鼠皮肤粗糙,无光泽,表皮与真皮界限不清楚,厚度变薄,含水量明显下降。核桃仁水提物治疗后,用药组小鼠皮肤变细腻,皱纹减少,表皮与真皮界线较清楚,同时表皮厚度有明显增加,而真皮也都相应增厚(P<0.05、P<0.01、P<0.01),含水量亦显著上升,差异均具有统计学意义(P<0.05、P<0.05、P<0.01)。2.与正常组比较,模型组胶原纤维厚度变薄,排列松散,Hyp含量明显减少,而MMP9表达增强。与模型组比较,核桃仁水提物中、高剂量组均能使胶原纤维厚度增加,排列紧密,同时Hyp含量显著升高,MMP9阳性细胞率及MMP9/β-actin OD比值均明显减少。3.免疫组化及免疫荧光法检测皮肤衰老小鼠皮肤细胞中Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达：与正常组比较,模型组小鼠皮肤细胞中Bax蛋白阳性细胞率明显增加,Bcl-2蛋白阳性细胞率显著减少,引起Bcl-2/Bax比值同步降低,而Caspase-3蛋白的阳性细胞率明显增加。与模型组相比,核桃仁水提物低、中、高剂量组皮肤中Bax蛋白阳性细胞率明显降低,而Bcl-2蛋白阳性细胞率显著提高,导致Bcl-2/Bax比值相应增大,而各治疗组小鼠皮肤中Caspase-3蛋白阳性细胞率均明显减少。.4. Western Bloting检测皮肤衰老小鼠皮肤细胞中Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达：与正常组相比,模型组小鼠皮肤中Bax/β-actin OD比值显著升高,而Bcl-2/β-actin OD比值明显减小,同时Caspase-3/β-actin OD比值增大。与模型组比较,各治疗组中Bax/β-actin OD比值均明显降低(P<0.05,P<0.05,P<0.01),核桃仁水提物中、高剂量组皮肤细胞中Bcl-2/β-actin OD比值明显提高,低剂量组的改变只有变化的趋势,并且中高剂量组皮肤中Bcl-2/Bax OD比值提高,而低剂量组Bcl-2/Bax OD比值变化不明显。此外,各治疗组小鼠皮肤细胞中Caspase-3/β-actin OD比值较模型组明显降低。结论：1.利用颈背皮下注射D-gal联合UV照射建立皮肤衰老动物模型,研究自由基代谢紊乱对皮肤老化的影响,具有一定科学性和创新特点。2.核桃仁水提物对皮肤衰老小鼠皮肤胶原纤维具有保护作用,其机制与增加Hyp合成、抑制MMP9蛋白表达有关3.核桃仁水提物可通过调控Bax、Bcl-2、Caspase-3等凋亡蛋白的表达来抑制细胞凋亡,减轻D-gal注射联合UV照射造成的小鼠皮肤老化损伤。