目的：本课题主要研究在肿瘤细胞中α-辅肌动蛋白-4（alpha-actinin-4,ACTN4）所发挥的作用机制。鉴定黑色素瘤细胞中ACTN4的下游信号通路及相应的信号分子，探索ACTN4作为多条信号通路的分子开关的具体机制，为将来研究ACTN4是否可以成为治疗黑色素瘤的潜在靶点提供理论上的依据。
　　方法：通过免疫组织化学方法观察并分析正常组织与癌组织中ACTN4的表达情况。首先构建ACTN4shRNA慢病毒质粒，将慢病毒质粒转染至HEK293T细胞内，培养48h后形成所需的慢病毒颗粒，将含有病毒颗粒的上清液收集起来，然后用上清液感染目的细胞（黑色素瘤细胞A375或食管癌细胞ECA109），经嘌呤霉素筛选，获得稳定低表达的细胞株。再通过克隆形成实验，检验抑制ACTN4表达对肿瘤细胞增殖的影响；通过蛋白质组学分析，利用KEGG数据库和GSEA数据库进行富集分析，获得ACTN4下游信号通路及相关信号分子；收集ACTN4稳定低表达的黑色素瘤细胞沉淀，裂解、定量、变性后通过Western blotting验证下游相关靶蛋白的表达变化情况。
　　结果：通过免疫组织化学分析发现在癌组织中的ACTN4表达量明显高于其在正常组织中的表达。在成功构建了ACTN4的shRNA慢病毒质粒后，顺利获得稳定低表达ACTN4的黑色素瘤细胞株以及食管癌细胞株。将对照组与ACTN4敲低组进行蛋白组学分析，得到差异基因集，再对差异基因集进行KEGG富集分析，其结果注释到包含帕金森氏症、氧化磷酸化作用、亨廷顿舞蹈症、阿尔兹海默症等下调信号通路，以及包含小细胞肺癌、TNF信号通路等上调信号通路；再对该差异基因集进行GSEA富集分析，证明了相关通路中的基因集成员表达下调或上调与ACTN4的敲低存在关系；收集ACTN4稳定低表达的黑色素瘤的细胞沉淀，进行Western blotting验证了ACTN4的敲低与下游相关通路的靶蛋白表达情况存在关联。
　　结论：ACTN4在癌组织中的表达明显高于其在正常组织中的表达；在黑色素瘤细胞和食管癌细胞中ACTN4敲低会明显抑制相应肿瘤细胞的增殖；KEGG富集分析和GSEA富集分析则揭示了ACTN4的敲低与其下游通路中的相关蛋白表达下调相关。Western blotting验证结果证实了ACTN4可能作为一个分子开关调节下游信号通路活性，也在一定程度上说明了肿瘤治疗过程中产生耐药性的原因。