Galectin-3高灵敏检测方法的建立及其在肾病诊断中的应用

来源 :浙江理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhegeyonghukeyi
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半乳糖凝集素-3(Galectin-3,Gal-3)是一种约30 k Da的嵌合型半乳糖凝集素,在细胞核、胞浆等多种部位均有表达。Gal-3作为能够结合β-半乳糖苷的可溶性蛋白,在细胞分化、凋亡、炎症和纤维化等众多生物学过程中发挥重要的作用。Gal-3易从损伤细胞和炎症细胞分泌到细胞表面和生物体液(如血清和尿液)中,可作为各种病理条件的诊断敏感生物标志物或预后评价指标。研究显示血清Gal-3水平升高与肾功能下降,慢性肾脏疾病和进行性肾功能不全的风险增加有关。目前关于Gal-3在肾病中作用的研究仍十分有限,本研究建立了高灵敏、宽检测范围的Gal-3的时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),并应用该方法检测健康人与肾病患者血清中的Gal-3水平,以评估Gal-3在肾脏疾病发生和进展中的临床意义。本研究通过包被Gal-3捕获抗体,利用镧系元素Eu3+标记的Gal-3检测抗体作为示踪剂,通过双抗体夹心法建立Gal-3-TRFIA检测方法,对其进行方法学评估,并定量检测健康人群和肾病患者血清中Gal-3水平。同时结合医院临床指标数据来探究Gal-3在肾脏疾病诊断和预测疾病进展方面的临床价值。研究结果如下:1.Gal-3-TRFIA法的灵敏度为0.85 ng/m L,优于ELISA(1.56 ng/m L)检测方法的灵敏度。该方法的检测范围为0.85-1000ng/m L,比ELISA的检测范围(1.56-100 ng/m L)要更宽。Gal-3-TRFIA的批内变异系数为3.45%,批间变异系数为5.12%。平均回收率为103.66%。在以下两种检测方法的检测范围内,Gal-3-TRFIA法检测结果与ELISA法检测结果的相关系数为0.83。Kim-1、Tim-3的交叉反应率均低于1%。2.应用Gal-3-TRFIA法检测特发性膜性肾病患者血清中Gal-3水平,结果显示,特发性膜性肾病患者血清Gal-3浓度(65.57±55.90 ng/m L)显著高于健康对照组(12.6±3.9 ng/m L,P<0.0001)。根据特发性膜性肾病患者和健康对照组血清Gal-3浓度进行受试者工作特征(ROC)曲线分析发现ROC曲线下面积为0.811(P<0.0001)。按四分位数划分的Gal-3浓度阶段显示,Gal-3水平最高的四分位个体的尿素/肌酐、尿素和血清肌酐水平明显更高,并与发生蛋白尿的高风险相关。3.应用Gal-3-TRFIA法检测狼疮性肾炎患者血清中Gal-3水平,结果显示,血清中的Gal-3浓度在狼疮性肾炎患者(33.6±17.8 ng/m L)中明显高于健康对照组(12.6±3.9 ng/m L,P<0.0001)。与临床血清生物标志物anti-ds DNA、C3和C4相比,在本研究中,Gal-3的阳性检出率(88.9%)高于anti-ds DNA的阳性检出率(14.8%)。Gal-3与C3或C4(100%/100%)联合检测可提高C3或C4(85.2%/66.7%)单独检测的阳性检出率。Jonckheere-Terpstra检验结果显示,Gal-3的浓度随着肾小球滤过率的降低而升高(P=0.001)。研究所得结论如下:1.首次建立了一种使用镧系元素Eu3+螯合物作为示踪剂的高灵敏的Gal-3-TRFIA方法来定量检测血清中Gal-3浓度。Gal-3-TRFIA检测方法的灵敏度和检测范围均优于ELISA,该方法性能稳定且与ELISA具有较好的相关性。2.特发性膜性肾病患者血清Gal-3浓度高于健康对照组,血清中高浓度的Gal-3水平对判断特发性膜性肾病患者的肾损伤程度具有价值。3.狼疮性肾炎患者血清Gal-3浓度高于健康对照组。血清Gal-3水平联合anti-ds DNA和C3、C4水平可提高狼疮性肾炎患者的阳性检出率,提示Gal-3可作为一种潜在的生物标志物,辅助anti-ds DNA、C3和C4诊断狼疮性肾炎。狼疮性肾炎患者血清Gal-3水平与e GFR、血清肌酐、尿素具有相关性,提示Gal-3在监测狼疮性肾炎患者的肾损伤程度有一定价值。
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