促红素动员血管内皮祖细胞促进真皮支架移植区血管化的实验研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:seniorma21
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目的:观察促红细胞生成素(EPO)对骨髓中血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)的动员效果,以及其促进脱细胞猪皮移植区血管新生的作用。通过优选动员方法和时机,为临床移植组织工程皮肤(tissue engineering skin, TES)及其它人工支架快速血管化提供新思路和简便易行、可推广应用的技术方法。方法:第一阶段:采用重组人促红素注射液(山西威奇达光制药有限公司提供,生产批号:20110425-1),参照文献介绍的剂量(EPO剂量1000IU/Kg*d-1与3000IU/Kg*d-1)与方法(连续腹腔注射7天)进行小鼠血管内皮祖细胞的动员。选用健康雄性昆明种小白鼠(避免雌激素的干扰)108只,随机分为A组(低剂量EPO动员组)、B组(高剂量EPO动员组)、C组(NS空白对照组),各组均为36只。各组在动员后1d、3d、5d、7d、10d、14d六个时间点随机取6只小鼠,心脏采血进行流式细胞仪检测Flk-1、CD133双标细胞的阳性率,结果以秩均值表示,统计学处理并进行对比分析。第二阶段:采用重组人促红素注射液(山西威奇达光制药有限公司提供,生产批号:20110425-1),以1000IU/Kg*d-1连续腹腔注射7天动员小鼠血管内皮祖细胞,动员第7天于小鼠背部皮下包埋脱细胞猪皮。选用健康雄性昆明种小白鼠(避免雌激素的干扰)48只,随机分为A组(EPO动员组)、B组(NS空白对照组),各组均为24只。各组在移植后3d、7d、14d三个时间点随机取6只小鼠,心脏采血进行流式细胞仪检测Flk-1、CD133双标细胞的阳性率,结果以秩均值表示,统计学处理并进行对比分析。在移植后3d、7d、14d、21d四个时间点观察脱细胞猪皮移植区病理形态学组织变化及免疫组化观察CD34标记的血管新生情况,计数微血管计数(MVD)结果以x±s表示,统计学处理并进行对比分析。结果:第一阶段:C组(NS对照组)在6个时间点双荧光阳性细胞比例均无显著差异(P>0.05)。A组(低剂量EPO动员组)与B组(高剂量EPO动员组)于动员后1d,3d,5d双荧光阳性细胞比例逐渐增加且于7d达到高峰。自动员后3d起,各时间点三组组双荧光阳性细胞比例均有显著差异(P<0.05);B组双荧光阳性细胞比例较A组和C组增加明显(P<0.05);A组双荧光阳性细胞比例较C组增加明显(P<0.05)。PO动员外周血中EPCs的效果成剂量依赖性。第二阶段:B组(NS对照组)在3个时间点双荧光阳性细胞比例均无显著差异(P>0.05)。A组(EPO动员组)于动员后3d,7d,14d双荧光阳性细胞比例逐渐增加且于第七天达到高峰。各时(?)点A组双荧光阳性细胞比例均较B组增加明显(P<0.05)。A组的动员EPCs促进脱细胞猪皮移植区血管新生的效果明显强于B组。结论:EPO连续7天腹腔注射能增加外周血EPCs的数量在动员后第7天时达到高峰,动员效果有效,效果成剂量依赖性。EPO连续7天腹腔注射促进脱细胞猪皮移植区血管新生。
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