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目的目前结核病的检测方法多种多样，免疫学检测方面主要包括基于细胞免疫的检测方法和基于体液免疫的检测方法。基于细胞免疫的检测包括皮肤试验和细胞因子的检测。基于体液免疫的检测包括抗原检测和抗体检测。免疫学检测获得较高敏感性和特异性的关键在于抗原的选择，选择出特异性好，敏感性高的结核分枝杆菌抗原在结核病检测方面具有重要意义。本课题主要是对结核分枝杆菌RD1区多种和Rv3452抗原进行制备，并研究制备出的结核分枝杆菌抗原在结核病诊断中的应用价值。方法根据文献报道，从TB databases数据库（http://tb.lanl.gov/content/index）下载结核分枝杆菌H37Rv菌株RD1区及Rv3452抗原的核苷酸序列和氨基酸序列。运用Biosun生物软件分析RD1区及Rv3452抗原表位分布情况，筛选峰值较高表位区段，而后截取其相应氨基酸序列和基因序列设计引物，采用分子克隆技术克隆相应基因，分别构建原核表达载体，诱导表达并纯化抗原，建立间接ELISA方法，检测患者血清中相应IgG抗体的水平。结果通过原核表达载体，共成功获得了5种RD1去抗原、全长Rv3452抗原和Rv3452-2区段抗原。在初步筛选出特异性和敏感性比较好的抗原的基础上扩大检测样本，并把样本进行分组。本实验所用样本分为三组，第一组为涂片和培养共同阳性组（83例），第二组为涂片阴性且培养阳性组（48例），第三组为涂片和培养共同阴性组（79例）。通过间接ELISA法进行检测，结果显示7个抗原敏感性分别为56.19%、26.67%、65.7%、58.57%、60.48%、70.85%和65.24%。Rv3871、Rv3874、Rv3875、Rv3876、Rv3879、Rv3452和Rv3452-2抗原痰培养阳性组的检出率分别为54.19%、59.54%、27.48%、54.96%、55.73%、70.8%和58.7%。Rv3871、Rv3874、Rv3875、Rv3876、Rv3879、Rv3452和Rv3452-2抗原对痰涂片检测为阴性组的检出率分别为62.21%、73.22%、25.98%、58.26%、66.92%、69.29%和69.29%。Rv3871、Rv3874、Rv3875、Rv3876、Rv3879、Rv3452和Rv3452-2抗原对痰培养阴性组的检出率为59.49%、78.48%、25.31%、65.82%、68.35%、70.88%和75.94%。Rv3871、Rv3874、Rv3875、Rv3876、Rv3879、Rv3452和Rv3452-2抗原血清学法检测检出率分别为56.19%、65.7%、26.67%、58.57%、60.48%、70.85%和65.24%。而对相同的样本涂片法的检出率为39.52%，培养法的检出率为62.38%。结果比较可得CFP-10（Rv3874）、Rv3452和Rv3452-2三个抗原的检出率高于培养法的检出率，同时这七个抗原除ESAT-6（Rv3875）抗原外其它抗原的检出率均高于涂片法的检出率。为了了解临床治疗过程中患者的IgG抗体变化水平并评价这些抗原在抗结核治疗效果评价中的应用价值，我们选取了88例治疗过程中的活动性肺结核患者的系列血清，分别为治疗0个月、2个月、4个月和6个月的血清样本。对以上标本中IgG抗体水平变化进行检测。结果显示7种抗原在88例结核病患者血清样本中的检出率分别为69.3%、73.8%、51.1%、84.1%、71.5%、68.1%和67.1%。其中OD值水平下降的患者所占的比率分别为47.5%、44.6%、40%、37.8%、31.7%、48.3%和45.7%。OD值上升的患者所占的比例分别为27.8%、35.7%、40%、31.1%、39.6%、40%和30.5%。OD值不变的患者所占的比例分别为24.6%、20%、20%、31.1%、28.5%、11.6%和23.7%，由此结果可得治疗过程中IgG抗体下降的患者所占的比例较大。结论结核病患者体内存在针对RD1区和Rv3452不同抗原的特异性抗体，而且不同抗原之间存在互补性。结核病患者体内抗体可以长期存在，在抗结核治疗期间呈现不同的变化趋势。血清学检测法灵敏度高、快速、操作简便、特异性强，可以作为细菌学检测的有效补充。