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无论在外界环境的刺激下,还是在有氧呼吸过程中,有氧呼吸的生物体内都不可避免地产生过氧化氢、羟基和超氧负离子等活性副产物,统称为ROS。较低水平的ROS可以维持有机体免疫系统的健康,但是较高的ROS水平超过体内清除酶系处理能力时,即产生氧化应激。ROS会对细胞内的蛋白质、脂质、核酸等大分子带来严重伤害。由于核酸是遗传信息的携带者,DNA的氧化损伤研究具有关键意义。ROS对DNA带来的伤害,主要体现对其碱基的氧化,在DNA四种碱基里,由于G的氧化还原电势较低首先发生氧化,形成主要损伤产物是8-oxoG。对于哺乳类生物,体内进化出一套分子架构能够辨别这些损坏的碱基,依靠碱基切除修复途径(base excision repair,BER),8-oxoG可以被8-羟基脱氧鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)剪切并修复。在氧化应激状态下,转录因子NF-κB能够调控多种氧还敏感的基因表达,而且其结合的保守序列富含三个连续的G。我们猜测:OGG1能够与NF-κB直接相互作用,通过调节其二聚体结合到启动子区的保守序列。我们前期研究结果表明,在氧化应激条件下,OGG1识别启动子区的8-oxoG时,其BER功能暂时失活,招募转录特异蛋白Sp1、转录起始因子II-D(TFIID),核糖磷酸RNA聚合酶II等聚集到启动子区域,起始氧还敏感的细胞因子和炎症基因的表达。在本实验中,为了探究OGG1与转录因子NF-κB相互作用的结构基础,我们建立了TNF-a处理的细胞培养模型:通过Western Blot探究了不同细胞中,NF-κB各亚基蛋白质表达情况。为了探讨Rel-A(p65)和p50与OGG1结构域的结合情况,我们构建了OGG1全长及不同结构域的突变原核表达质粒,通过GST-pull-down检测了OGG1与Rel-A(p65)和p50的结合情况。实验结果表明,在HEK293细胞、Raw细胞和A549细胞中NF-κB蛋白表达量较大。在TNF-a刺激30分钟时,Rel-A(p65)和p50可以明显的入核,入核的Rel-A(p65)和p50可以和OGG1形成复合物。通过GST-pull-down实验,结果表明,OGG1第180位至262位氨基酸和第167位至345位氨基酸位点,可以同时与入核的NF-κB亚基Rel-A(p65)和p50结合。本实验初步检测了OGG1与NF-κB互相作用的机制。进一步解析了OGG1与NF-κB位点的结构域,可以为小分子抑制物的设计提供依据,以期特异性地阻断促炎基因的转录活化,改善先天免疫失调所造成的过度炎症、慢性炎症相关基因疾病的治疗策略,具有重要的转化医学意义。