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目的:运用四逆散对早年母婴分离应激动物模型进行干预,探查肝调畅情志“中枢调控”作用的关键脑区的变化,揭示调肝方药四逆散抗早年应激诱发抑郁的效果及作用机制途径,为四逆散防治早年不良事件应激诱发幼年、青少年及成年情志疾病的临床应用提供实验依据。方法:(1)第一部分母婴分离对SD大鼠行为学的影响采用80只1日龄(PND1)的SD大鼠,随机分为母婴分离(MS)组和空白组,雌雄各半。MS组于PND1-21给予每日2次、每次3h的母婴分离应激,空白组不做任何干预。所有大鼠均于PND21断奶,在PND22-PND52期间正常饲养,每周称重两次,不给予任何刺激。分别于PND56、PND58、PND60、PND67、PND74进行糖水偏爱实验、旷场实验、强迫游泳实验、Morris水迷宫实验和高架Zero迷宫实验检测。(2)第二部分四逆散对母婴分离应激大鼠抑郁样行为和BDNF相关通路的影响采用108只1日龄(PNDl)的雄性Wistar大鼠,随机分为空白组、母婴分离组(模型组)、氟西汀+MS组(阳性组)、四逆散低剂量+MS组(SNS-L)、四逆散中剂量+MS组(SNS-M)、四逆散高剂量+MS组(SNS-H),每组18只,各组再随机分为三个年龄阶段组,即幼年期组、青少期组和成年期组。除空白组不做任何干预之外,其余大鼠于PND1-21给予每日4h的母婴分离应激。PND22结束造模,开始每日给予各组相应的药物干预,监测体重。分别于PND23-PND27(幼年期组)、PND37-PND41(青少期组)、PND51-PND55(成年期组)进行糖水偏爱实验、旷场实验、强迫游泳实验检测,于PND28(幼年期组)、PND42(青少期组)、PND56(成年期组)取材,通过蛋白免疫印迹实验检测大鼠脑内海马组织的五羟色胺1A受体(5-HT1AR)、磷酸化cAMP依赖蛋白激酶(p-PKA)底物蛋白、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达、免疫组化实验检测原位5-HT1AR表达。结果:(1)母婴分离对SD大鼠体重的影响在PND22～PND52期间,雄性大鼠的母婴分离组体重增长量比空白组显著下降(p<0.05);而雌性大鼠母婴分离组的体重增长量相比于空白组无显著变化(p>0.05)。(2)母婴分离对SD大鼠行为学的影响1)糖水偏爱率 雌雄大鼠的母婴分离组糖水偏爱率均显著低于空白组(p<0.01)。2)强迫游泳实验 雄性大鼠的母婴分离组在强迫游泳实验中的不动时间显著高于空白组(p<0.05)。雌性大鼠的不动时间相较于空白组仅有升高趋势,无统计学差异(P>0.05)。3)旷场实验 雄性大鼠的母婴分离组在旷场实验中的活跃度间显著低于空白组(p<0.01),其中央区域时间和距离较空白组仅呈现出下降趋势。雌性大鼠的母婴分离组中央区域时间、中央区域距离和活跃度相较于空白组均出现降低趋势,但无统计学差异(p>0.05)。4)Morris水迷宫实验 雌性大鼠的平台穿越次数和平台象限停留时间均显著低于空白组(p<0.05,0.01);雄性大鼠的母婴分离组的平台穿越次数显著高于空白组(p<0.05),其平台象限停留时间仅呈现升高趋势(p>0.05)。5)高架Zero迷宫实验 雄性大鼠的母婴分离组在高架Zero迷宫实验中进入开臂的次数百分比显著低于空白组(p<0.05),其开臂滞留时间百分比低于空白组,但差异无统计学意义(p>0.05)。雌性大鼠进入开臂的次数百分比和开臂滞留时间百分比均显著低于空白组(p<0.01)。(2)四逆散对母婴分离应激大鼠抑郁样行为和BDNF相关通路的影响1)体重变化 与空白组相较,幼年期大鼠模型组体重增长量显著降低(p<0.05);与模型组相比,阳性组的体重增长量显著升高(p<0.05),SNS-L、SNS-M和SNS-H组的体重增长量比模型组有所升高,但无统计学差异(p>0.05)。青少期大鼠的模型组体重增长量比空白组显著降低(p<0.05);与模型组相比,仅SNS-L组的体重增长量显著增加(p<0.05),而其余给药组体重增长量比模型组升高而无统计学差异(p>0.05)。与空白组相比,成年期大鼠中模型组体重增长量显著降低(p<0.05);SNS-L、SNS-M和SNS-H组的体重增长量均比模型组显著升高(p<0.05,p<0.01,p<0.05),阳性组体重增长量几乎与模型组持平。2)糖水偏爱率 与空白组相较,幼年期模型组大鼠的糖水偏爱率显著降低(p<0.05);SNS-H组的糖水偏爱率显著高于模型组(p<0.01),而其余给药组相较于模型组稍有所升高,差异无统计学意义(p>0.05)。青少期模型组大鼠的糖水偏爱率比空白组降低,无统计学差异(p>0.05);SNS-L、SNS-M组的糖水偏爱率比模型组显著升高(p<0.01,p<0.05),阳性组、SNS-H组无显著性差异(p>0.05)。与空白组相比,成年期大鼠模型组的糖水偏爱率显著下降(p<0.05);与模型组相比,给药组中仅SNS-L组的糖水偏爱率显著升高(p<0.05)。3)强迫游泳实验 与空白组相比,幼年期模型组大鼠漂浮不动时间显著升高(p<0.01);给药组漂浮不动时间低于模型组,但差异无统计学意义(p>0.05)。青少期模型组大鼠的漂浮不动时间显著高于空白组(p<0.01);给药组漂浮不动时间比模型组显著降低(p<0.01)。与空白组相比,成年期大鼠模型组漂浮不动时间显著升高(p<0.01);与模型组相比,阳性组、SNS-L组、SNS-M组和SNS-H组的漂浮不动时间均显著降低(P<0.01,P<0.05,p<0.01,p<0.01)。4)旷场实验 与空白组相较,幼年期和青少期模型组大鼠在旷场中的中央区域时间和路程均有所降低,给药组较高于模型组,差异均无统计学差异(p>0.05);活跃度在幼年期大鼠中的趋势与中央区域时间、路程相似,而在青少期各组间无明显变化(p>0.05)。成年期模型组大鼠在旷场中的中央区域时间比空白组显著下降(p<0.05),SNS-H组显著高于模型组(p<0.05);模型组中央区域路程比空白组均有所降低,给药组较高于模型组,差异均统计学差异(p>0.05);各组成年期大鼠的活跃度差异无统计学意义(p>0.05)。5)5-HT1AR、p-PKA底物蛋白、p-CREB、CREB、BDNF蛋白表达 幼年期大鼠模型组5-HT1AR和CREB的蛋白表达比空白组有所下降,给药组的表达相比于模型组呈现升高的趋势,但差异均无统计学意义(pp>0.05);其模型组pCREB和BDNF的表达显著低于空白组(p<0.05),与模型组相比,阳性组、SNS-M组和SNS-H组表达略有升高但无统计学差异(p>0.05);p-PKA的蛋白表达在组间无显著差异(p>0.05)。青少期大鼠模型组BDNF和pCREB表达比空白组显著下降(p<0.05);SNS-M组BDNF表达显著高于模型组(p<0.05),其余给药组BDNF仅呈现升高趋势(p>0.05),各给药组pCREB表达比模型组仅呈现升高趋势(p>0.05)。CREB蛋白表达在模型组中较低于空白组,给药组的表达均高于模型组,差异均无统计学意义(p>0.05)。p-PKA底物蛋白蛋白表达在模型组中低于空白组、给药组高于模型组,各组间均无显著差异(p>0.05)。5-HT1AR相对蛋白量在各组间均无明显差异(p>0.05)。成年期大鼠的模型组5-HT1AR的蛋白表达比空白组显著降低(p<0.05),四逆散三个剂量组的表达均比模型组显著升高(p<0.05),阳性组仅呈现出升高趋势(p>0.05);模型组BDNF表达显著低于空白组(p<0.05),SNS-L组和SNS-H组的表达显著高于模型组(p<0.05),其余给药组无统计学差异(p>0.05);模型组p-CREB的蛋白表达显著低于空白组(p<0.05),SNS-L组和SNS-M组的表达显著高于模型组(p>0.05),而阳性组和SNS-H组p-CREB表达比模型组有所升高,但无统计学差异(p>0.05);CREB的蛋白表达在模型组中均较低于空白组而无统计学差异(p>0.05),阳性组和SNS-L组的CREB表达显著高于模型组(p<0.05);p-PKA蛋白表达在模型组中较低于空白组且给药组的表达高于模型组,但差异无统计学意义(p>0.05)。结论:早年母婴分离应激可诱导大鼠出现行为绝望、快感缺乏等抑郁样行为表现,同时伴随一定程度的焦虑样表现,因此哺乳期母婴分离模型可以成功模拟早期生活的不良应激诱导抑郁动物模型。四逆散可以缓解早年母婴分离诱导的大鼠幼年、青少年和成年期抑郁样行为,其机制可能使通过上调5-HT1AR/CREB/BDNF信号通路而发挥抗抑郁效果。