【摘 要】
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目的:探讨西玛津对小鼠精母细胞（GC-2 spd）增殖的影响及可能的作用机制。方法:以小鼠睾丸组织cDNA为模板PCR扩增SPAG6蛋白编码区域,构建SPAG6/pEGFP-N2重组质粒,并通过酶切鉴定
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目的:探讨西玛津对小鼠精母细胞（GC-2 spd）增殖的影响及可能的作用机制。方法:以小鼠睾丸组织cDNA为模板PCR扩增SPAG6蛋白编码区域,构建SPAG6/pEGFP-N2重组质粒,并通过酶切鉴定是否构建成功。将SPAG6/pEGFP-N2、COPS5/pCS3和pAP1-luc共转染至COS-7细胞,通过双荧光素酶报告基因实验检测SPAG6对AP-1转录活性的影响。将COPS5/pCS3、c-Jun/pcDNA3和SPAG6/pEGFP-N2质粒共转染COS-7细胞,Western blot检测过表达SPAG6时磷酸化c-Jun蛋白的表达水平,探讨SPAG6影响AP-1转录活性的机制。以不同浓度西玛津溶液（0、5、25、125μg/mL）染毒GC-2 spd细胞24、48和72h,采用CCK-8法检测细胞存活率。西玛津暴露24h后,Western blot检测GC-2 spd细胞内SPAG6蛋白、COPS5蛋白、磷酸化c-Jun蛋白和Bax蛋白的表达,并通过qPCR检测促凋亡因子Bax及抗凋亡因子Bcl-2 mRNA的表达。结果:成功构建了SPAG6/pEGFP-N2重组质粒,COS-7细胞内过表达SPAG6能抑制AP-1的转录活性,使COPS5诱导的磷酸化c-Jun蛋白表达水平显著降低。25μg/m L和125μg/mL西玛津溶液能降低GC-2 spd细胞存活率、SPAG6蛋白的表达水平;提高磷酸化c-Jun蛋白、Bax mRNA和Bax蛋白的表达水平;但对COPS5蛋白及Bcl-2 mRNA的表达没有明显影响。结论:西玛津对GC-2 spd细胞具有毒性作用,可能通过抑制SPAG6表达从而调节AP-1信号通路介导的凋亡相关基因的表达,诱导生精细胞凋亡,导致精子发生障碍。
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