【摘 要】
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通过BamH Ⅰ/NdeⅠ双酶切将重组质粒pGEM-pac-1和pGEM-pac-1上切出pac-1全长基因插入原核表达载体pET-5a,构建了表达载体,并转化受体菌BL21（DE3）pLysS,经IPTG诱导获得高效表达,
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通过BamH Ⅰ/NdeⅠ双酶切将重组质粒pGEM-pac-1<＃1>和pGEM-pac-1<＃2>上切出pac-1全长基因插入原核表达载体pET-5a,构建了表达载体,并转化受体菌BL21（DE3）pLysS,经IPTG诱导获得高效表达,产生分子量为43KD的蛋白条带.诱导、收集菌体超声破碎完全后,离心,上清液和沉淀同时电泳,发现表达产物以非可溶的包涵体和可溶的上清两种形式存在.通过紫外线吸收法确定上清中的蛋白含量,并确认了pac-1基因表达产物对RDV-dsRNA具有很强的降解活性.为进一步获得抗多种病毒的转基因植物,该研究选择了重要农作物小麦和水稻为对象,分别构建了用于小麦和水稻转化的两种植物表达载体.首先合成下游引物,PCR扩增pac-1基因片段,通过KpnⅠ/SacⅠ双酶切将基因片段插入到含Emu启动子的质粒pEmu-mcs-N中,构建用于转化小麦的植物表达载体pEmu-pac-1<＃2>,并利用花粉管通道法转化小麦.通过XmaⅠ/SacⅠ双酶切将pac-1基因插入用于农杆菌转化的植物表达载体pBI121,构建了植物表达载体pBI-121-pac-1<＃2>.
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