利用cDNa-AFLP技术对大白菜、萝卜杂交种差异表达基因的研究

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杂种优势是生物界普遍存在的十分重要的生物学现象,并在多种动植物中得到成功的利用。芸薹属(Brassica)作物是杂种优势利用最为普遍的一类作物。国内外学者在近一个世纪对杂种优势机理的研究中做了大量的理论和实验探讨,在方法和指导思想上取得了一些进展,提出了许多的学说。杂种优势产生的机理仍然是一个末解之谜,还有许多问题需要深入研究。   本文以大白菜和萝卜杂交种及其亲本为材料,应用cDNA-AFLP技术研究基因的差异表达,方法如下:在莲座期剪取嫩叶,提取叶子的总RNA,利用反转录酶将其反转录成cDNA后进行AFLP(amplifiedfragmentlengthpolymorphism)指纹图谱分析。cDNA-AFLP操作中选择EcoRⅠ和MseⅠ对双链cDNA进行限制性酶切,得到的粘性末端分别连接上人工接头,预扩增后再用64对选择性引物扩增并在6%聚丙烯酰胺凝胶电泳后用银染方法染色进行指纹图谱分析。   本研究共得到44个在杂种F1特异表达的差异片段,分属40个unigene,43个可以在NCBI数据库中找到同源序列(包括EST),只有32个序列功能已知。序列分析表明,这些已知功能基因参与了碳代谢、激素合成、转录、细胞周期、物质运输、信号转导、逆境响应和花发育等相关过程。本实验为深入研究萝卜、白菜种间杂种优势和基因组互作提供了非常有价值的信息。
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