狂犬病是由狂犬病毒引起的人兽共患的全球性传染疾病,存在于全球150多个国家和地区,根据世界卫生组织WHO 2016的统计数据,全球每年大约有59000人死于该病,其中95%发生在亚洲和非洲等发展中国家。狂犬病是一种在出现临床症状后几乎100%会致命的病毒性传染病,因此研制狂犬疫苗对于预防与控制狂犬病毒传播是非常必要的。糖蛋白(G)是狂犬病病毒唯一能诱导宿主产生中和抗体的蛋白,也能有效的刺激T淋巴细胞增殖,并决定病毒的毒力。近些年的实验研究显示,天然的狂犬病毒糖蛋白(G)是以三聚体形式存在的跨膜糖蛋白,然而可溶性G蛋白单体的免疫原性和保护性效果并不十分理性,表明狂犬病毒G蛋白的有效免疫原性是非常依赖G蛋白三聚体空间构象的完整性。Fibritin foldon(Fd)是T4噬菌体fibritin蛋白质的结构域,能够辅助fibritin蛋白质形成三聚体,并通过氢键、疏水相互作用和盐桥的方式来稳定天然三聚体结构。利用foldon的这种性质,融合可溶性蛋白质形成三聚体,帮助并稳定目的蛋白形成正确的、免疫原性更高的构象,从而达到更好的治疗与预防效果。目前已被广泛应用于流感病毒糖蛋白,HIV-1,RSV糖蛋白等,并获得理想的效果。自1994年以来,DNA疫苗已被提议作为用于预防传染性疾病便宜、有效的策略,且其可行性已经在许多动物模型中被验证,并被用于人类病毒疫苗临床试验中。经过二十多年的研究,证实了 DNA疫苗对多种感染性(病毒,细菌和寄生虫)和非感染性(过敏和肿瘤)疾病能引起有效的细胞免疫和体液免疫。同时DNA疫苗具有成本低,设计和管理简单,生产相对较快的优势,为DNA狂犬疫苗领域的发展注入新的动力。本文以真核VR1012质粒为载体,分别构建了 G蛋白全长(mRVG)质粒,G蛋白截断型(包含有分泌信号肽和胞外区,mRVGst)质粒,具有foldon结构域的G蛋白融合(tRVGst-LI、tRVGst-IQG8)质粒。重组质粒能表达不同大小的G蛋白,以CpG为免疫佐剂,对BALB/c小鼠进行免疫。经过3次免疫后,结果显示,小鼠产生了较强的IgG水平,mRVG(全长型抗原)免疫组抗体IgG是mRVGst(截短型抗原)免疫组抗体水平的1.6倍,是tRVGst-LI、tRVGst-IQG8(融合型抗原)免疫组的1.4倍;tRVGst-LI与tRVGst-IQG8免疫组分泌的IgG抗体是mRVGst(截短型抗原)免疫组的1.4倍。经过抗体分型以及细胞因子检测后,实验结果显示本实验DNA疫苗产生了较强的Th1细胞免疫应答。通过快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测中和抗体(RVNA)活性,并通过颅内攻毒实验研究该DNA疫苗的保护力。结果显示,融合型抗原tRVGst-LI、tRVGst-IQG8中和抗体水平是9.3 IU/ml和12.7 IU/ml,保护力是50%～67%,免疫效果优于截短型抗原mRVGst的4.3 IU/ml,16.7%,但是弱于全长型抗原mRVG的17.4 IU/ml,保护力83.3%。表明foldon结构域在一定程度上能增加可溶性融合G蛋白的免疫原性,但是G蛋白的免疫原性不仅与胞外区有关,还与跨膜区及胞外区有关,即更依赖于结构的完整性。