【摘 要】
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杆状病毒-昆虫细胞表达系统是80年代发展起来的新型真核基因表达系统,已有几百种基因在该系统中得到了表达.人生长激素(human growth hormone,HGH)是调节人体生长发育和新陈
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杆状病毒-昆虫细胞表达系统是80年代发展起来的新型真核基因表达系统,已有几百种基因在该系统中得到了表达.人生长激素(human growth hormone,HGH)是调节人体生长发育和新陈代谢的重要多肽类激素,该研究利用该系统成功表达了HGH,表达产物经SDS-PAGE,Western-blot分析,分子量及免疫活性均与天然产物相同.主要研究内容以及研究结果如下:第一.利用传统的杆状病毒载体表达系统(Baculovirus Expression Vector System,BEVS),通过构建的含有hGH基因的转移载体pVL1393-hGH与野生型杆状病毒AcMNPV DNA共转染培养的昆虫细胞Sf9,使发生同源重组,外源基因hGH代替AcMNPV中的多角体基因.第二.在传统的BEVS中,需要经过多轮空斑筛选才能得到纯化的重组病毒.第三.在Bac-to-Bac系统中,利用PCR诱变方法改变hGH基因5-UTR序列,构建含不同hGH基因5-UTR序列的重组病毒rAcV-Bac-Δ1hGH,rAcV-Bac-Δ2hGH,rAcV-Bac-Δ3hGH,经感染昆虫细胞后比较hGH基因表达的水平.第四.昆虫细胞是该表达系统的重要组成部分,三种不同的昆虫细胞Sf9,Sf21,High Five感染病毒后对HGH的表达水平不同.hGH基因在昆虫细胞中的表达存在很多影响因素,该研究从基因表达调控以及细胞等方面探讨了hGH基因在杆状病毒-昆虫细胞系统中表达的影响因素,为高效表达hGH基因提供了理论基础和新的途径.
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