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研究背景与目的:乳腺癌是目前发病率极高的威胁女性健康的恶性肿瘤,近年来随着类固醇激素拮抗剂(三苯氧胺等)和针对HER2基因靶向治疗药物(曲妥珠单抗)的使用,使部分乳腺癌患者从治疗中获益,有效延长了患者的生存时间,但对于激素受体(ER、PR)检测阴性、HER2基因无扩增的病例,即“三阴性”乳腺癌患者,目前的治疗效果仍旧欠佳。组蛋白乙酰化与去乙酰化作为基因转录活化与抑制的标志,近年来被认为在肿瘤发生发展起着重要的作用,随着组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACIs)的问世,人们又提出了所谓“转录治疗”的概念,为恶性肿瘤的治疗提供了新的治疗途径,本研究将在乳腺癌组织中初步探讨HDACs在基因转录水平促进乳腺癌发生发展的可能机制,为乳腺癌患者选择新的治疗方法和最佳治疗时机提供理论依据。材料及方法:1、从川北医学院附属医院病理科2010年1月至2014年6月期间外检存档的乳腺恶性肿瘤石蜡病理样本531例中筛出有完整临床资料的浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)278例,另随机选取乳腺导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)33例,乳腺非典型性导管增生(atypical ductal hyperplasia,ADH)5例,乳腺普通型导管增生(usual ductal hyperplasia,UDH)6例,以乳腺纤维腺瘤(fibroadenoma,FA)中的非增生性导管作为正常对照。2、利用免疫组化学法检测乳腺增生性病变谱系(UDH-ADH-DCIS-IDC)各阶段病变样本中HDAC1、HDAC2、HDAC3蛋白的表达水平,探讨其变化规律及其临床病理意义。采用Western-blot方法检测浸润性乳腺癌新鲜标本中HDAC1、HDAC2、HDAC3蛋白的表达,结合IDC石蜡样本IHC检测结果,探讨各蛋白与临床病理指标以及肿瘤分子分型的意义。3、统计学分析方法:采用SPSS16.0统计软件进行统计学分析,以P<0.05为具有统计学意义。乳腺增生性病变谱各组间的率比较采用2c检验;HDAC1/2/3蛋白与临床病理指标的相关性分析采用Spearman等级相关分析;用均数±标准差(X±S)表示蛋白相对平均灰度值,不同组间蛋白表达差异采用配对T检验和卡方检验;Kaplan-Meier生存分析采用Log-rank检验方法;采用Cox比例风险回归模型,进行单因素和多因素预后相关因素分析。无瘤生存以影像学检查发现患者复发病灶或远处转移病灶为时间终点,以患者死亡为总生存率事件终点。结果：1、临床资料:在278例乳腺浸润性导管癌患者,中位年龄50岁,平均49岁(31-82岁),276例(99.2%)以乳腺包块为首发症状,2例以乳头溢液/溢血就诊;左乳152例(54.7%),右乳126例(45.3%);其中病变位于外上象限111例(39.9%),为最常见的好发部位,肿瘤平均直径3.6㎝(1.0-10.0㎝);174例(62.6%)患者伴有同侧腋窝淋巴结转移,转移淋巴结数1-31枚不等,7例发生远处转移(2.5%),其中2例伴骨转移,2例肺转移,3例肝转移。组织学分级:Ⅰ级17例(6.1%),Ⅱ级194例(69.8%),Ⅲ级67例(24.1%)。125例获得随访(45.0%),随访中9例死亡(7.2%),116例健在(92.8%)(其中5例为带瘤生存)。2、免疫组织化学结果:在FA,UDH,ADH,DCIS病变中,HDAC1的阳性表达率分别为:45%,100%,100%,90.9%;HDAC2的阳性表达率分别为:50%,100%,100%,81.8%;HDAC3的阳性率表达分别为:90%,83.3%,80.0%,66.7%。在278例乳腺浸润性导管癌中,247例(88.8%)表达HDAC1,235例(84.5%)表达HDAC2,201例(72.3%)表达HDAC3,三者在肿瘤组织中的平均阳性表达率分别为66.7%,54.3%和52.8%。176例(63.3%)表达ER,158例(57%)表达PR,179例(64.4%)表达HER2,204例(73.4%)高表达Ki67(≥14%)。3、Western-blot结果:在IDC病例中HR(hormon receptor,HR)(ER/PR)阳性组HDAC1蛋白的表达明显高于HR阴性组(P<0.05),Ki67高表达组HDAC1蛋白的表达明显高于Ki67低表达组(P<0.05),HER2阳性组HDAC2蛋白的表达明显高于HER2阴性组(P<0.05),HER2过表达型乳腺癌HDAC3蛋白的表达明显高于基底亚型乳腺癌(P<0.05)。4、分子分型:278例浸润性乳腺癌患者中,Luminal A型7例(2.5%),Luminal B型(HER2-)63例(22.7%),Luminal B型(HER2+)113例(40.6%),HER2过表达型66例(23.7%),基底亚型29例(10.4%)。5、统计学结果5.1 HDAC1/2在UDH、ADH、DCIS、IDC中的阳性表达率均高于FA(P<0.05),而HDAC3在DCIS、IDC中的阳性表达率则低于FA(P<0.05),但在UDH、ADH中的表达率与FA没有显著性差异。HDAC1/2/3三种蛋白在ADH与DCIS病变之间,蛋白的表达均具有显著差异性(P<0.05),而在UDH与ADH之间以及DCIS与IDC之间,则无差异(P>0.05)。5.2 HDAC1、HDAC2、HDAC3在管腔A型的阳性表达率均高于其他三个亚型(P<0.05)。HDAC3在HER2过表达型的表达显著高于基底亚型(P<0.05),但HDAC1/2的阳性表达率在二者间不具有统计学差异。HDAC1/2/3在管腔B型(HER2-)与管腔B型(HER2+)的阳性表达率不具有统计学差异(P>0.05),管腔B型与HER2过表达型和基底亚型的阳性表达率都不具有统计学差异(P>0.05)。5.3 HDAC1蛋白的表达与ER、PR、Ki67蛋白的表达均具有正相关关系。HDAC2蛋白表达与HER2呈正相关关系。HDAC1在低级别肿瘤的表达显著高于高级别肿瘤,HDAC3在高级别肿瘤的表达显著高于低级别肿瘤,HDAC2与肿瘤得组织学级别无相关性。HDAC1/2/3蛋白的阳性表达率与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结有无转移均无相关性(P>0.05)。5.4生存分析:HDAC1蛋白低表达、淋巴结转移数与患者术后无瘤生存期和总生存率呈负相关相关(P<0.05),多因素Cox回归分析显示:仅淋巴结转移数是IDC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论：1、HDAC1/2在乳腺增生性病变谱中各病变中的表达均显著高于非增生性乳腺导管上皮,而HDAC3的表达则低于非增生性乳腺导管上皮,说明HDAC1/2对乳腺癌的发生具有一定促进作用,HDAC3在癌变发生前对乳腺具有一定保护作用。2、HDAC1/2在乳腺UDH、ADH病变中全表达,在DCIS、IDC病变中表达下调,该转折可能是乳腺导管增生性病变癌变的关键,提示组蛋白乙酰化水平的改变在乳腺癌发生发展过程中是一个早期重要事件。3、在IDC中,HDAC1蛋白的表达与ER、PR、Ki67蛋白的表达具有一定协同作用,高表达状态提示患者预后好,术后的总生存期和无瘤生存期延长。因此,我们推测乳腺癌发生可能的表观遗传学机制是HDAC1通过上调激素受体水平和Ki67蛋白的表达,提高了患者术后对激素受体拮抗剂和化疗的敏感性,从而延长了患者术后生存期。4、HDAC1/2/3蛋白的表达与乳腺癌的分子亚型相关,尤其高表达于腔A型;在ER和PR阴性的乳腺癌患者中,HDAC3对HER2基因有扩增的乳腺癌的发生发展更具有显著的促进作用。