肝移植目前已成为治疗终末期肝脏疾病的唯一有效手段,急慢性排斥反应仍是临床器官移植中难以克服的问题。环孢素A和FK506等免疫抑制剂的应用已成为肝移植成功必不可少的治疗措施,但长期应用会带来许多致命的副作用。为减少免疫抑制剂的使用剂量和时间,降低毒副作用并使移植受体长期存活,国内外学者作了大量实验研究。我们选用改进的缝合法行大鼠原位肝移植,根据hIL-10具有免疫调节的原理,通过逆转录病毒载体(MSCV)将hIL-10导入供体肝脏,以期延长大鼠原位肝移植存活,并为诱导免疫耐受及临床器官移植提供理论依据。 一、大鼠原位肝移植模型改进的研究 为比较两种改进后大鼠原位肝移植模型建立的优缺点,我们对三套袖法的修肝技术及套管制作进行改进,实施大鼠原位肝移植30例,采用改进的缝合法实施大鼠原位肝移植70例。三袖套法手术成功率80%,一周存活率8%,缝合法手术成功率90%,一周存活率72%。结果表明改进后的三袖套法虽然明显缩短手术时间及无肝期,但手术后并发症多,缺乏实际应用价值,改进后的缝合法是建立稳定大鼠肝移植模型的有效方法。 二、hIL-10延长大鼠原位肝移植存活的研究 为探讨人白细胞介素10(hIL-10)逆转录病毒载体的构建及对大鼠原位肝移植存活期的影响。我们将人白细胞介素10(hIL-10)克隆基因片断,经双酶切后定向插入到逆转录病毒载体(MSCV)中,用脂质体法转染PA317包装细胞,以G418筛选阳性克隆。将Wistar对SD大鼠原位肝移植模型分三组,组Ⅰ为空白对照组,组Ⅱ为MSCV空载体灌洗组,组Ⅲ为MSCV-hIL-10灌洗组,观察大鼠存活期及肝脏功能变化。结果表明hIL-10基因片断插入到MSCV载体中经转染包装后得到2×10~7CFU/ml的分泌hIL-10的病毒悬液,hIL-10分泌量为1220ng/10~6细胞/24h。组Ⅲ与组Ⅰ、组Ⅱ比,大鼠存活期明显延长(P<0.01)。