美洲黑杨新无性系的SSR和ISSR指纹鉴别及应用

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美洲黑杨是具有多用途的快速生长的杨树树种,木材可以用作纸浆和人造板的材料,也可用来绿化栽植,并且其选育的无性系后代是杨树育种工程不可缺少的材料。在过去的三十年中,杨树育种工作者已经培育出许多黑杨无性系用于商业栽培和育种研究。数量庞大的黑杨无性系间形态相似,差异较小,无性系命名混乱,这样会严重影响美洲黑杨的遗传研究、品种推广及保护和育种效率。传统的形态学鉴定困难,时间长并且不能准确鉴定杨树无性系;同工酶标记和生化标记也都表现出一些明显的局限性。本文采用SSR和ISSR分子标记技术对包括钻天杨和69杨在内的6个黑杨无性系开展指纹图谱的初步构建,进而为杨树林木品种鉴定以及黑杨育种研究提供理论依据。结果如下:1.使用标准的SSR指纹图谱技术构建黑杨(Populus deltoides)无性系图谱,10对SSR筛选引的物具有特异性。PCR图谱统计得出了132个总位点,包括125个多态性位点,多态性百分率为94.67%,扩增条带片段大小在100-1000bp。2.本研究显示应用ISSR指纹图谱技术可以准确鉴定6个供试材料,筛选的10对ISSR引物,用于构建黑杨无性系ISSR指纹图谱,总共扩增了82个位点,多态性位点为53个,各无性系多态性位点的百分率介于10.98%到69.51%。平均每个引物扩增出8.2个位点。3. ISSR与SSR聚类分析结果基本一致,都显示陕三与其母本69杨聚为一类,三个美洲黑杨无性系因具有很高的遗传相似性聚为第二类,欧洲黑杨钻天杨单独分为一类,即对照材料的实验结果也与预期相吻合。4.本实验将钻天杨和03-北1-15中扩增出的特异ISSR条带转为SCAR特异性条带,快速鉴别黑杨无性系SCAR标记转化的成功,证明这种方法的可行性,我们可以通过大量筛选ISSR引物,获得每一个黑杨无性系材料的特异性SCAR标记,可以为杨树无性系材料的大量快速鉴定提供依据。
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