论文部分内容阅读
目的 神经生长因子(nervegrowthfactor，NGF)是在神经营养因子中最早被发现，目前研究最为透彻的，具有神经元营养和促突起生长双重生物学功能的一种神经细胞生长调节因子。NGF是通过神经营养因子（neurotrophins，NTs）低亲和力受体(p75NTR)和高亲和力受体（Trks，包括TrkA、B、C、）发挥作用。近年来研究表明，NGF除了对神经系统以及神经细胞的生物学作用外，NGF还具有免疫学效应，许多免疫细胞具有NGF受体。另外还具有抗病毒效应，尤其是对带状疱疹病毒(Herpesvaricella-zostervirus，VZV)有一定的抑制作用，对呼吸合胞病毒(Respiratorysyncytialvirus，RSV)具有抗病毒活性。狂犬病病毒(Rabiesvirus，Rabiesvirus)和乙型脑炎病毒（Japaneseencephalitisvirus，JEV），都是嗜神经病毒，由这两种病毒引起的神经系统疾病是严重的致死性疾病，目前尚缺乏有效地抗病毒药物，疫苗接种是目前唯一有效地预防措施之一。本研究就NGF抗病毒效应，来研究其对JEV和RV体外的抗病毒效应。 材料与方法 1、选择合适的细胞株，制备病毒感染细胞模型。本实验采用目前广泛应用于乙脑疫苗和狂犬疫苗生产的BHK21细胞和Vero细胞，制作乙型脑炎病毒感染BHK21细胞和狂犬病毒感染Vero细胞的细胞模型。 2、采用MTT法测定NGF在实验剂量范围内对BHK21细胞和Vero细胞生长的毒性作用。 3、选用昆明系小鼠动物实验，采用Reed-Muench法测定JEV和RV的半数致死量(lgLD50/0.03ml)。 4、培养Vero细胞，接种不同剂量NGF，Reed-Muench法检测RV病毒的半数细胞感染量（lgTCID50/0.04ml）。 5、采用蚀斑减少实验测定乙脑病毒JEV的病毒滴定，即蚀斑形成单位(lgPFU/0.4ml)。 6、选用RV感染Vero细胞模型，MTT法测定NGF对感染不同剂量RV的Vero细胞存活率; 7、蚀斑减少实验测定NGF对BHK21细胞感染JEV的蚀斑减少率。 8、统计学方法 采用SPSS16.0软件进行统计学处理，计量材料以两组间比较采用t检验，以p＜0.05为差异有统计学意义，检验水准α=0.05。 实验结果 1、乙型脑炎病毒感染BHK21和狂犬病病毒感染Vero细胞模型成功建立。 2、MTT法检测结果表明，实验剂量1000BU/ml的NGF对两种细胞无毒性作用，实验组和对照组无显著性差异。 3、小鼠实验结果表明，JEV病毒的病毒滴度为7.32lgLD50/0.03ml，RV病毒的病毒滴定为5.75lgLD50/0.03ml。 4、Vero细胞培养接种不同剂量的RV，逐日观察细胞的CPE，通过MTT法计算得出该病毒的7.10lgTCID50/0.04ml。 5、蚀斑减少实验结果表明，不同剂量JEV感染BHK21后，随着病毒稀释度的增大，蚀斑数量逐渐减少。选择平行度比较好的稀释度计算得出，JEV的蚀斑形成单位为Lg8.70PFU/0.4ml。 6、MTT法显示，不同剂量NGF作用于感染RV的Vero细胞，随着NGF剂量的增加，细胞的生长抑制率减少。实验结果表明，NGF对RV在一定剂量(1000BU/ml)有抑制作用。 7、蚀斑减少实验表明，随着NGF浓度的提高，蚀斑减少率逐渐提高，在1000BU/ml时，蚀斑减少率可达22.54％。 结论 1、NGF除了常规的的生物学效应外，还有一定的抗病毒的生物学效应，体外实验证明能够提高感染JEV和RV的细胞存活率。 2、NGF对JEV的抗病毒活性比对RV的抗病毒活性明显，可能是由于不同病毒对细胞的适应性不同。