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目的:
鸡眼草(Kummerowia striata(Thunb.) Schindle.)为豆科鸡眼草属鸡眼草的全草。黄酮类化合物为鸡眼草的主要活性成分。中药鸡眼草性味甘淡凉,临床上用于治疗婴幼儿轮状病毒肠炎及婴幼儿迁延性慢性腹泻,疗效显著。
本文旨在对鸡眼草进行生药学研究,包括鸡眼草的质量标准研究、鸡眼草止泻药理作用研究、鸡眼草抗菌活性组分的筛选和鸡眼草总黄酮的提取工艺研究四方面。
方法:
一、鸡眼草的质量标准研究
采用性状鉴别和叶、茎横切面及粉末的显微鉴别方法鉴别鸡眼草。采用高效液相色谱法同时测定鸡眼草中染料木素和山奈酚的含量,色谱柱:DiamonsC18(迪马公司,4.6mn×250mm,5μm),流动相:甲醇-0.1%磷酸(72(∶)28),流速1.0mL·min-1,检测波长370nm。采用高效液相色谱法测定鸡眼草中木犀草苷的含量,色谱柱:DiamonsC18(迪马公司,4.6mm×250mm,5μm),流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长350nm。
二、鸡眼草止泻药理作用研究
构建小鼠慢性腹泻模型,除模型组和阴性对照组外,进行药物治疗,观察鸡眼草对番泻叶所致小鼠腹泻的影响;运用炭末推进法观察鸡眼草对小鼠小肠蠕动功能的影响。
三、鸡眼草抗菌活性组分的筛选
高效液相色谱法分析经过大孔树脂的不同浓度的乙醇洗脱液,山奈酚、木犀草苷、染料木素三种化合物作为对照品,通过色谱图比较各组分化学成分的差异。运用连续稀释法测定不同浓度的乙醇洗脱液对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus,MRSA)的最低抑菌浓度(MinimumInhibitory Concentration,MIC)。通过比较各组分MIC值的不同,找出有效抗菌的组分。扫描式电子显微镜(Scanning Electron Microscope,SEM)下观察MRSA在不同MIC值溶液中的形态。
四、鸡眼草总黄酮的提取工艺研究
单因素实验:考察药液流速、乙醇洗脱液浓度、上样液浓度对大孔树脂吸附效果的影响。根据单因素实验结果,设计正交实验,优化提取工艺。
结果:
鸡眼草的药材性状、显微鉴别特征明显,采用高效液相色谱法测定了鸡眼草中染料木素、山奈酚、木犀草苷三种化合物的含量,方法可靠、重复性好。
鸡眼草低中高剂量组对番泻叶所致小鼠腹泻有明显的治疗作用,鸡眼草高剂量组疗效与中药阳性对照组、化学药阳性对照组相当;鸡眼草中高剂量组对小鼠小肠有显著的抑制推动的作用。
70%乙醇洗脱的组分黄酮含量在各组分中最高,其MIC最小,SEM下可观察到金黄色葡萄球菌在70%组分的不同的MIC溶液中细胞壁已破坏,细胞壁边缘不规则。
确定了鸡眼草总黄酮的优化提取工艺为:药液流速为3mL/min,乙醇洗脱液浓度60%,上样液浓度为0.019mg/mL,转移率为58.2%。
结论:
本文对鸡眼草进行了生药鉴别,采用高效液相色谱法对鸡眼草中染料木素、山奈酚和木犀草苷三种化合物的含量进行了测定,建立了鸡眼草的质量标准;鸡眼草对番泻叶所致小鼠腹泻有明显的治疗作用,对小鼠小肠有显著的抑制推动的作用;总黄酮特别是黄酮苷元可能是鸡眼草抗菌活性成分,其机制可能为破坏细胞壁从而裂解细胞;实验得到了鸡眼草总黄酮的优化提取工艺条件。