研究背景： 雌激素可通过多种途径发挥对心血管系统的保护作用。除了抗氧化、降低低密度脂蛋白和升高高密度脂蛋白等作用外，雌激素主要通过基因和非基因这两种途径发挥效应。经典的基因途径主要是通过雌激素与其受体（ER）结合，影响基因转录，从而产生一系列的生物学效应。该途径潜伏期长，但作用持久。非基因途径是雌激素的一种快速效应，在数分钟内既可产生作用，但持续时间短。雌激素的作用机制，特别是非基因调节机制，非常复杂，还远不清楚。 虽然雌激素对心血管系统及骨骼系统的保护作用已得到肯定，但妇女绝经后，长期行雌激素替代治疗（ERT）能显著增加患生殖系肿瘤的风险，困而极大地限制了它在临床上的应用。因此，一些具备雌激素对骨骼或心血管等系统的保护效应，但没有致生殖系肿瘤等副作用的新药就应运而生。这些药物的共同特点是对不同组织的ER具有选择性的激动作用，因而把这些药物统称为选择性雌激素受体调节剂（SERM）或雌激素类 第四军医大学博士学位论文 似物。开发和研究SERM 已引起人们的极大兴趣．idoxifene是新一代 SEIUvi，它对心血管系统的作用仍需深入地研究． 雌激素通过ER调节心血管系统的功能，但ER在动物心脏的分布特 点及性别差异，雌激素对自身受体表达的影响等还未得到系统的研究。 雌激素对心肌细胞钙转运及离子通道的调节，是其发挥对心脏保护作用 的重要机制．虽然，雌激素对心肌细胞钙转运的影响有一些初步的研究， 但结果还存在矛盾。钙通道作为调节细胞钙转运的一重要途径，雌激素 对它的作用机制也不清楚．研究表明雌激素对血管的作用也是其心血管 保护效应的重要方面，idoxifene作为一种新的旺IUvi，它对血管的舒张 作用及机制，目前未见报道。 研究目的： 1．阐明ER在大鼠心脏的分布特点；大鼠去势后，ER在心脏的表达变化； 应用培养的。。肌细胞，观察雌激素对ER表达的影响； 2．探讨雌激素对大鼠心肌细胞钙转运的影响及其机制； 3．观察雌激素和idoxifene对心肌细胞离子通道的影响； 4．研究雌激素和idoxifene对血管的舒张作用及机制． 主要的实验结果： 1．实验第一部分通过免疫组织化学和细胞培养方法，观察了 ERa在大鼠 心脏的分布特点，表现为ERa在心肌中层的分布明显少于心内膜和心 外膜；ERa在成年大鼠心脏的表达无明显的性别差异；在双侧卵巢切 除后，大鼠心脏ERa免疫反应阳性细胞数明显下降，在雌激素替代治 疗后，可恢复到正常水平．BRa阳性细胞数（阳性细胞数／高倍视野）在 正常对照大鼠的心外膜和内膜分别为：118土45，104土38；卵巢切除组： 60土34，5609（P＜0．05 vs control）；雌激素替代治疗组：107士34， 99士33（P＞o刀5 Vs COtltrOI）。离体培养的心 肌细胞也有＊a免疫反应阳 性物质分布，加入 176－estrsdi＊”‘m。凡）后，ERQ的染色强度明显 增强（P＜0．001），由未给药组的 45．457t6．954（U），增力口到给药组的 6二．874上8石9二（m。 2．实验第二部分通过膜片钳全细胞j己录和细胞内灌流枝术，发现雌激素 4 第四军医大学博士学位论文 一 口刁）可剂量依赖性地抑制大鼠心室肌细胞L型钙通道电流 （I＊。＊）、雌激素受体阻断齐 ICI 182，780（10 pol／L），tamoxifen（l 呷＊）均不能阻断雌激素对钙通道的抑制效应；应用不能通过细胞 膜的耦联了牛血清白蛋白的雌激素田ST习SA，100 pOUL），ie胞外灌 流也对IC。。有抑制作用，但细胞内灌流EST－BSA却无明显的抑制效 应。应用激光共聚焦显微镜，发现门 P七stradiol＊ poffe）可轻度 升高培养的静息心肌细胞胞内钙浓度［C4勺卜荧光强度历 Wens吨FI）值由54．2。13．6增力。到86．5土15．3（俩，P＜0．OS），大约在 二－3min内达到峰值并稳定；17 6－estradiol（10 mpow）可显著降低具有 自发收缩活动的。C肌细胞钙瞬变幅度，荧光强度由给药前的且8．5土4．3 减小?