目的：探讨犬骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离、纯化、扩增的方法，证实其自我更新能力及多向分化潜能，为细胞移植治疗急性心肌梗死(AMI)做准备。方法：无菌条件下用骨髓穿刺针获取骨髓液，用密度为1.073g/ml的Percoll分离液通过密度梯度离心法获取骨髓单个核细胞，用含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液种植细胞，通过贴壁筛选法获得纯化的MSCs。细胞生长融合达80%左右时，用胰酶消化传代细胞，细胞消化、传代培养三代后，可获得大量的纯度较高的MSCs。对不同代MSCs进行细胞计数，并绘制生长曲线，观察细胞生长特性。应用流式细胞仪对MSCs表面标记蛋白CD29、CD34进行表面抗原鉴定。取第3代MSCs分别进行成骨组织以及脂肪组织的诱导分化，通过茜素红以及油红O染色检测是否诱导分化为成骨组织以及脂肪组织。结果：采用密度梯度法获得犬骨髓单个核细胞，刚分离的细胞体积较小，呈圆形。细胞培养72小时后观察可见单个或少量成集落样生长的贴壁细胞克隆，形态大多呈短梭形，原代细胞培养10-12天达到传代标准。细胞传代后增殖较快，MSCs生长曲线绘制显示，MSCs生长曲线呈S型，第6-7天生长达到高峰。流式细胞检测显示犬MSCs CD29呈阳性表达，CD34呈阴性表达。多向分化能力检测显示，在不同诱导环境下MSCs可向成骨组织以及脂肪组织分化。结论：犬MSCs取材方便，通过密度梯度离心法可获得单核细胞。利用贴壁筛选法在体外培养、扩增可在短期内获得大量纯化的、性质稳定的MSCs。传代后MSCs生长迅速，在不同的诱导环境下可以向成骨组织以及脂肪组织分化，证实其具有多向分化能力，可为体外移植治疗急性心肌梗死提供丰富的细胞来源。目的：探讨多功能心腔内导管移植骨髓间充质干细胞(MSCs)治疗急性心肌梗死(AMI)的可行性及对缺血心肌血管新生的影响。方法：通过结扎犬冠状动脉左前降支的方法建立AMI模型，AMI模型建立一周后，将存活的犬随机分成细胞移植组和PBS对照组。分离颈动脉，在超声心动图的引导下，沿颈动脉将多功能导管逆主动脉送入左心室。在心腔内超声图像下，识别左室前壁心肌搏动较弱区域或搏动不规则区域，在心腔内超声监控下，通过镍钛合金注射针将体外培养、扩增的MSCs注射到梗死中心区以及梗死边界区，每个点注射0.2ml，每只犬注射5个点，对照组注射相同剂量的PBS液。完成注射后，动物继续饲养4周，处死动物，取心肌组织作冰冻切片和石蜡切片。通过冰冻切片观察移植细胞存活情况，采用HE染色以及vWF免疫组化染色观察心肌梗死区组织结构变化以及血管新生情况。结果：所有动物均成活到实验结束，无动物死亡。镍钛合金注射针插入心肌内注射时，可发现室性早搏，但无恶性心律失常发生。整个实验过程中动物生命体征平稳，无心跳骤停、室性心动过速、血栓形成等严重并发症发生。在所有动物中，多功能心腔内导管显示靶向心肌解剖结构，能够实时观察到注射针在心肌内的位置，能够区分低回声信号的心腔、心肌以及高回声信号的注射针。组织冰冻切片显示，靶向移植心肌有移植细胞存活。HE染色显示对照组心肌梗死区心肌组织炎性细胞浸润，心肌细胞消失，纤维瘢痕组织增生显著。细胞移植组心肌细胞排列紊乱，炎性细胞浸润较少，纤维瘢痕组织增生较少。光学显微镜下观察，VWF染色微血管为棕黄色，细胞移植组新生血管数量较多，对照组血管数量较少，两组比较差异有统计学意义。结论：多功能心腔内导管经心内膜移植MSCs治疗AMI安全、可行，可以将MSCs递送到靶向心肌， MSCs可以促进缺血心肌血管管再生。目的：探讨多功能心腔内导管移植骨髓间充质干细胞(MSCs)治疗急性心肌梗死(AMI)对缺血心肌心室重构的影响。方法：通过结扎犬冠状动脉左前降支的方法建立AMI模型，AMI建模前、建模后1周以及细胞移植4周后分别对动物进行心功能进行检测。获取二维超声心动图，于左心室乳头肌水平描记M型超声，分析心脏功能，测得左室射血分数(LVEF)。同时获得心尖2腔或4腔切面，使用双平面Simpson法验证，取三个心动周期测量的平均值。细胞移植4周后，将测量导管缓慢送入左心室，连接生理通道记录仪，描记心率、左心室收缩末压力、左心室舒张末压力，并计算左心室压力最大上升和下降速率。动物取材后，称取心脏总质量，计算心脏质量指数。标本石蜡包埋后进行VG染色,显微镜下观察染色情况并获取图片，测量左室截面积和纤维瘢痕面积，计算梗死面积。结果：超声心动图显示，动物建模前，细胞移植组和对照组左心室射血分数LVEF相似。动物建模1周后，细胞移植组和对照组LVEF相似，都出现明显的降低。细胞移植4周后，细胞移植组LVEF有所增加，对照组LVEF减少，与对照组相比较，细胞移植组平均LVEF有明显改善，差异有统计学意义。血流动力学检测显示，细胞移植组血流动力学参数较对照组有显著改善。心脏重量指数显示，细胞移植组心脏重量较对照组小，差别有统计学意义。VG染色显示示，细胞移植组纤维瘢痕组织增生较少。心肌梗死面积检测显示，细胞移植组梗死面积小于对照组。结论：运用多功能心腔内导管移植MSCs治疗AMI可以改善心脏功能，并抑制心室重构的发生，可能为MSCs移植治疗缺血性心脏病提供一种新的介入治疗平台。