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卵巢癌是女性生殖器三大恶性肿瘤之一。由于卵巢癌早期症状不明显,大部分卵巢癌患者在发现时已经进展到中晚期,并且发生腹腔、肝脏实质甚至胸膜转移扩散,临床上通常以手术联合辅助化疗药物治疗中晚期卵巢癌。但是现在有大量晚期卵巢癌患者面临铂类或者紫杉醇耐药的难题,导致治疗效果不佳,如今分子靶向治疗已是国内外关注的热点,现已有数种分子靶向药物用于治疗恶性肿瘤,并取得较满意的疗效,所以探索新的卵巢癌靶向药物对于卵巢癌的治疗是尤为重要的。去泛素化酶(deubiquitinases,DUBs)参与了蛋白质泛素化的负向调节过程,即蛋白质的去泛素化。DUBs主要功能为降解细胞内结构异常或多余的蛋白,以达到调节细胞生长、信号转导等目的,因此在多种生理、病理方面发挥着至关重要的作用。ML364是泛素特异性蛋白酶2(ubiquitin-specific protease 2,USP2)的抑制剂,能特异性的抑制USP2的活性,从而影响USP2的作用。目前关于ML364在卵巢癌中的作用及机制尚不明了,有待进一步研究。本研究主要通过体外实验,如MTT实验、细胞迁移实验、流式细胞凋亡实验及Western Blot等,来探究ML364在卵巢癌细胞中作用与机制,评价ML364对卵巢癌细胞的影响,为今后ML364应用于临床卵巢癌的治疗提供依据。目的探究去泛素化酶USP2的抑制剂ML364对卵巢癌细胞增殖、迁移、周期阻滞、细胞凋亡的影响及其作用机制。方法1.MTT实验:通过MTT检测ML364对卵巢癌细胞A2780,Hey A8及OVCAR8的抑制作用。2.通过免疫荧光实验检测不同浓度的ML364处理卵巢癌细胞A2780,Hey A8及OVCAR8后,细胞增殖标志物Ki67的表达量的变化。3.平板克隆形成实验:检测不同浓度的ML346对卵巢癌细胞A2780,Hey A8及OVCAR8的增殖抑制效应。4.划痕实验及Transwell迁移实验:通过划痕实验及Transwell迁移实验检测ML364对卵巢癌细胞A2780,Hey A8及OVCAR8迁移能力的影响。5.流式细胞周期实验:通过流式细胞周期实验检测ML364作用于卵巢癌细胞A2780,Hey A8及OVCAR8后,细胞周期的变化。6.Western Blot实验:检测相关蛋白的表达变化。结果1.MTT实验,平板克隆实验及免疫荧光实验的结果显示,ML364处理卵巢癌细胞后,可以明显抑制其增殖能力,并且呈浓度依赖性。2.流式细胞术检测结果表明ML364处理卵巢癌细胞后,G1期细胞明显增多,S期细胞减少,G2/M期细胞减少,出现G1期细胞阻滞现象。Western Blot结果显示ML364处理卵巢癌细胞后,细胞周期相关蛋白cyclin Dl表达也明显降低,并且呈浓度与时间依赖性。3.细胞凋亡标志性蛋白cleaved-PARP的表达增加,并且随着药物浓度增加而增高。4.ML364处理卵巢癌细胞A2780,Hey A8及OVCAR8后,YAP的表达未见明显延长,TAZ的表达明显降低。提示TAZ可能是ML364作用的相关分子。结论1.ML364显著抑制卵巢癌细胞的增殖。2.ML364诱导卵巢癌细胞发生周期阻滞。3.ML364诱导卵巢癌细胞发生凋亡。4.TAZ可能是ML364作用的相关分子。