URSA患者外周血中Th17/Treg细胞的平衡及Th17细胞在母胎界面中的表达研究

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目的:研究Th17/Treg细胞在不明原因复发性流产(unexplained recurrentspontaneous abortion,URSA)患者外周血中的变化及Th17细胞在母胎界面中的表达。方法:第一部分:收集门诊URSA患者、正常早孕和正常育龄期妇女外周血,提取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),刺激培养4h后用流式分析法分析CD4~+IL-17~+、CD4~+CD25~+FoxP3~+细胞变化,来探讨Th17/Treg细胞在不明原因复发性流产(URSA)可能的作用。第二部分:收集门诊URSA患者、正常早孕和正常育龄期妇女外周血,提取PBMC,刺激培养3天后收集上清,用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)法定量检测样本中IL-17的表达。第三部分:收集门诊URSA患者人工流产时的局部蜕膜及绒毛组织(共六份)、正常早孕妇女行人流术的局部蜕膜及绒毛组织(共十份),均石蜡包埋,用免疫组织化学的方法观察局部组织中IL-17A的表达。结果:1、URSA患者外周血中Th17/Treg细胞的变化(均数±标准差%)URSA患者外周血中CD4~+IL-17A~+/CD4~+细胞的比例(2.36±1.02%)明显高于正常早孕(1.20±0.51%)和正常育龄期妇女(1.47±0.54%),差异显著(P<0.05)。而其在正常早孕和正常育龄期妇女间差异无显著性(P>0.05)。URSA患者外周血中CD4~+CD25~+FoxP3~+/CD4~+细胞的比例(5.43±1.39%)明显低于正常早孕(7.82±1.51%),差异显著(P<0.05)。正常早孕较正常育龄期妇女(4.81±1.79%)明显增加,差异显著(P<0.05)。Th17/Treg细胞间在妊娠的维持中处于相对的平衡,对于妊娠的维持是有利的。2、ELISA法定量检测样本中IL-17的浓度(均数±标准差pg/ml)三组样本中URSA组的IL-17浓度为(839.99±376.53pg/ml)最高,与正常早孕(460.13±269.88pg/ml)和正常育龄期妇女(465.08±282.52pg/ml)相比,差异显著(P<0.05)。其他两组间差异无显著性。3、免疫组织化学的方法来观察母胎界面中IL-17A的表达发现URSA患者局部蜕膜组织和绒毛组织中IL-17A阳性表达,而在正常早孕人工流产组局部蜕膜组织和绒毛中也表达,但是相对较低,因例数太少,无法做统计学分析,只能说明Th17细胞可能参与了URSA的发病。结论:正常早孕患者外周Treg细胞数目增多,而Th17细胞处于较低水平,维持着一定平衡状态,向Treg方向偏倚,则有利于妊娠的维持,一旦平衡打破,Treg降低,而Th17升高,将会可能导致流产的发生。Treg在妊娠期参与抑制母体对同种异体移植物胎儿的免疫反应,Treg细胞数目增多有利于妊娠的维持,而较高水平Th17细胞对于妊娠维持是不利的,那么由此可见低水平的Th17细胞在妊娠维持中也可能发挥了一定的作用。URSA中Treg细胞数目的降低,同时其外周血中Th17细胞是增加的,向Th17方向偏倚,对于妊娠的维持是不利的,导致流产的发生。此外,URSA患者母胎界面中IL-17A的表达,也表明Th17细胞在母胎界面也可能参与了URSA的发病。除了Th1/Th2之间的平衡外,Th17/Treg细胞的平衡在URSA的发病中也可能发挥了一定的作用,丰富了妊娠免疫的理论,为进一步了解URSA的发病机制,为治疗URSA提供新的切入点和新策略。
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