南方鲇Dmrt1及其亚型cDNA的克隆和表达的研究

来源 :西南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chengjiangjie
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本研究采用RT-PCR与SMARTRACE相结合的方法从南方鲇(Silurus meridionalis)克隆得到Dmrt1及其亚型全长cDNA。南方鲇Dmrt1(Southern catfish Dmrt1,ScDmrt1)cDNA全长1347bp,包括一个编码295个氨基酸的开放阅读框、一个加尾信号(AATAAA)和一个poly(A)尾巴。ScDmrt1亚型cDNA全长1513bp,包括一个编码271个氨基酸的开放阅读框和一个poly(A)尾巴。ScDmrt1及其亚型含有所有DM基因具有的典型特征——DM-domain。序列对比发现scDmrt1及其亚型与革胡子鲇Dmrt1最相似,它们同属Dmrt1一类群,区别于Dmrt2—8。 在对scDmrt1及其亚型的序列分析中发现,它们只有3′末端有区别,而在5′端则完全相同。因此我们推测scDmrt1亚型是由于其前体mRNA在3′末端通过选择性剪切产生的。同时,通过扩增scDmrt1基因第4、5个内含子的片段和对其它脊椎动物Dmrt1基因结构的分析,我们推测scDmrt1基因可能含有6个外显子,区别于其它脊椎动物的5个外显子。测序结果表明扩增片段中包含了属于第4和第5个外显子部分和内含子的供体位点(gt)和受体位点(ag)。因此我们推测scDmrt1的剪接模式不同于scDmrt1亚型,其产生是由于将scDmrt1前体mRNA剪切掉了第5个外显子,并拼接上最后一个外显子形成,而其亚型则由其前5个外显子拼接而成。 另外,我们对scDmrt1及其亚型在南方鲇各组织中的表达进行了研究。研究表明scDmrt1及其亚型在精巢和卵巢均有表达,表达量都是精巢高于卵巢。尤其是scDmrt1亚型在精巢的表达远远高于卵巢。ScDmrt1为雌雄性腺特异表达,而其亚型高表达于性腺,同时在雄鱼微弱表达于肠和肾脏。 用雌激素E2、芳化酶抑制剂Fadrozole和雌激素受体拮抗剂Tamoxifen对孵化后(days after hatching,dah)5天的南方鲇仔鱼进行浸浴处理20天。65dah时的检测表明在Fadrozole处理组和Tamoxifen处理组,scDmrt1及其亚型的表达上调,而E2组和对照组没有scDmrt1
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