抑制维氏气单胞菌乳酸菌的筛选及抑菌活性初步研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:sisi200713
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乳酸菌(lactic acid bacteria;LAB)是一类能把可发酵碳水化合物(葡萄糖或乳糖)生成大量乳酸的革兰氏阳性细菌的总称。主要来自于自然土壤、粪便及肠道等。乳酸菌能产生有机酸、过氧化氢及细菌素等具有抑菌活性的物质;是理想的抗生素的替代品之一。维氏气单胞菌(Aeromonas veronii;A.veronii)属于最为常见的水生生物有害菌之一;其能释放溶血素、细胞毒素以及肠毒素等多种致病因子;进而引发鱼、虾等水生生物的批量死亡;给水产养殖业的养殖者带来巨大的经济损失。  本研究从鲤鱼、鲫鱼、武昌鱼3种鱼肠道内容物中筛选乳酸菌;共分离120株菌;通过菌株菌落形态观察、革兰氏染色、触酶实验;对筛选出的菌株进行初步鉴定;得到98株疑似为乳酸菌。制备无菌细胞培养液;以维氏气单胞菌TH0426为指示菌;通过打孔法进行抑菌试验;发现有较强抑菌效果的共15株菌。最后;对有抑菌效果的菌进行基因组提取;16S rDNA基因序列分析等鉴定种属;有11株菌为肠球菌;3株干酪乳杆菌;1株植物乳杆菌。  其次;将筛选乳酸菌针对其耐药性、耐受性(胆盐、不同 pH、蛋白酶、温度)、抑菌谱试验、粘附性、动物安全性以及生长曲线试验等部分生物学特性进行研究。结果显示;只有4株(L31、L2、W21、D2)乳酸菌可以拮抗9株维氏气单胞菌。L31、L2、W21能耐受0.1%~0.4%胆盐浓度范围内存活;而D2对胆盐不耐受;3株乳酸菌pH3~pH7值时活菌数呈上升的趋势;胰蛋白酶对3株乳酸菌的存活率基本没有影响;L31、L2能耐受50℃;但在60℃和70℃时;活菌数下降的显著。在乳酸菌的抑菌谱研究中;3株乳酸菌均有较强的抑制作用。3株乳酸菌均有良好的黏附能力;且干酪乳杆菌 L31 黏附能力最强。动物安全性实验证实;3株乳酸菌对小鼠、鲤鱼均无影响;无任何病变及死亡。  最后;对乳酸菌 L31、L2、W21 三株菌株进行抑菌活性的初步探讨:乳酸菌培养全液和培养上清液均具有显著的抑菌作用;当培养上清液的pH 调至6.0时;3株乳酸菌对维氏气单胞菌TH0426无抑菌活性;三种不同的蛋白酶对培养上清液的抑菌活性无明显变化;过氧化氢酶对培养上清液抑菌活性无明显变化;培养上清液热处理后;抑菌活性基本保持不变。在电镜观察中;经植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)W21、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)L2、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)L31培养上清液处理的维氏气单胞菌TH0426;出现不同程度的破坏。综上所述;乳酸菌培养上清液中可能以有机酸为主;在抑制有害菌中起着关键作用。
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