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目的:观察阿霉素预处理(doxorubicin-preconditioning,DPC)对家兔肝缺血再灌注损伤(HepaticIschemia-Reperfusioninjury,HIRI)的保护作用,并与缺血预处理(Ischemia-Preconditioning,IPC)相比较,探讨两种预处理方式的作用机制,以期为临床治疗提供实验依据。
方法:1.造模:按随机数字表法,取健康日本大耳白兔60只,雌雄不限,体重2.0kg~2.5Kg。60只日本大耳白兔被随机分为4组,均行开腹手术,术前禁食12h,自由饮水,以0.3%的戊巴比妥钠30mg/Kg,经耳缘静脉麻醉,分离一侧颈外静脉,以备采血。随后4组动物分别行以下造模处理:A组(假手术组,n=15),仅行开腹手术游离肝十二指肠韧带,不阻断其血流,作为正常对照组,以排除手术因素对实验结果的干扰;B组(缺血再灌注组,n=15),消毒开腹显露肝门,游离肝右叶以及肝左内侧叶的血管、胆管,用无损伤血管钳夹闭血管造成该叶完全缺血60min后松夹,再灌注60min,形成肝缺血再灌注损伤模型;C组(缺血预处理组,n=15),先行夹闭血管造成该叶反复缺血5min,再灌注5min,共三次,随后再行再缺血60min,再灌注60min;D组(阿霉素预处理组,n=15),经耳缘静脉注射阿霉素(1mg/Kg)24h后,缺血60min,再灌注60min。
2.血清检测:经过以上造模处理后,A、B、C组动物均在对应时点经耳缘静脉注射与D组等量生理盐水。
3.病理制作:各组分别在预处理后快速取右肝组织以100g/L中性甲醛固定48h后取出,石蜡包埋切片,行常规HE染色并作免疫组织化学法链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶(SABC)染色检测血红素氧和酶(Hemeoxygenase-1,HO-1)在肝组织的表达。