【摘 要】
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目的:研究CD40L对体外培养的人结肠癌HCT-116细胞株增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:采用不同浓度(0.1ug/ml、0.5ug/ml、1.0ug/ml、2.0ug/ml、3.0μg/ml)的CD40L处
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目的:研究CD40L对体外培养的人结肠癌HCT-116细胞株增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:采用不同浓度(0.1ug/ml、0.5ug/ml、1.0ug/ml、2.0ug/ml、3.0μg/ml)的CD40L处理处于对数生长期的结肠癌HCT-116细胞,倒置显微镜观察细胞生长情况,MTT比色法测定计算各实验组和对照组细胞的生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测CD40L对HCT-116细胞周期和细胞凋亡的影响,RT-PCR半定量法检测VEGF、bcl-2及fas mRNA的表达水平,Western Blot法测定肿瘤细胞中细胞内VEGF、Bcl-2及Fas蛋白的表达情况。结果:(1)MTT法显示一定浓度的CD40L可抑制HCT-116细胞增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性,实验组与对照组及各实验组之间比较均有统计学意义(p<0.05)。(2)FCM结果显示,HCT-116经CD40L作用48小时后,细胞有明显凋亡,且随浓度的增加和作用时间延长而增强,G2/M期细胞比例上升,G0/G1期细胞比例下降,呈剂量依赖性(p<0.05)。(3)RT-PCR法显示,HCT-116细胞的fas mRNA随CD40L浓度增加而表达增加,VEGF、bcl-2 mRNA随药物浓度增加表达下降(p<0.05)(。4)Western Blot法结果显示,随着不同浓度的CD40L处理48h后,HCT-116细胞中VEGF、Bcl-2蛋白表达下降,Fas蛋白表达升高(p<0.05)。结论:(1)CD40L可以抑制体外培养的人结肠癌HCT-116细胞生长,具有时间和剂量依赖性,将细胞周期阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡。(2)CD40L对HCT-116细胞生长抑制和诱导凋亡作用可能与上调Fas基因转录和蛋白表达,下调VEGF、Bcl-2基因转录和蛋白表达有关。
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