金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）作为一种重要致病菌，在自然界中广泛分布，能够引起人类感染和细菌性食物中毒。由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒发生频率极高，我国每年发生的此类中毒事件也非常多见。通过对生鲜乳及生鲜肉中金黄色葡萄球菌及其肠毒素（staphyloccal enterotoxins，SEs）的检测，了解其基因的分布情况，针对金黄色葡萄球菌I型肠毒蛋白进行表达及纯化，并进行单克隆抗体的制备，为后续建立检测方法的研究做准备。本文内容包括以下3部分：　　试验一：金黄色葡萄球菌肠毒素在食品中的污染调查　　2015年从山东、内蒙、吉林、广东四个地区采集生鲜肉（猪肉、鸡肉、牛肉、羊肉）共1055份，利用常规检测方法和PCR对金黄色葡萄球菌菌株进行分离鉴定，分离并保存88株金黄色葡萄球菌，然后针对生鲜肉中分离并保存的88株菌株及生鲜牛乳中分离并保存的235株菌株进行13种肠毒素基因的检测，其中SEB和SER均未检出，在生鲜牛乳中，SEI的阳性率最高，阳性率为17.45％， SEA、SEC、SED、SEE的阳性率相对较高，分别为12.77%、9.36%、11.91%、14.04%。在生鲜肉中SEH和SEI的阳性率相对较高，分别为13.64%和11.36%。从数据中可以看出， SEI的含量相对较多。　　试验二：金黄色葡萄球菌SEI蛋白的表达及鉴定　　根据GenBank公布的SEI基因序列设计引物，以产SEI肠毒素的金黄色葡萄球菌分离株的基因组DNA为模板，PCR扩增出的基因经测序分析，其核苷酸序列与GenBank公布的序列一致。将SEI基因纯化后连接到pEASY-E1载体中，构建原核表达载体pEASY-E1-SEI，转化到DH5α中后进行质粒的提取，将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，用IPTG诱导表达SEI重组蛋白，将表达的蛋白用NiSO4亲和层析柱纯化、PBS透析获得纯化的SEI重组蛋白，经SDS-PAGE电泳与蛋白质免疫印迹法(Western blotting)验证，重组蛋白与预期蛋白大小相符，且具有良好的抗原性。　　试验三：金黄色葡萄球菌SEI重组蛋白单克隆抗体的制备　　用纯化的SEI重组蛋白与弗氏佐剂充分乳化免疫BALB/c小鼠，制备饲养层细胞，制备脾细胞并与 SP2/0骨髓瘤细胞融合，经酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）检测、通过有限稀释进行亚克隆、筛选，获得能稳定分泌抗SEI单克隆抗体的杂交瘤细胞株3株，分别命名为S2E5、S1F4、S3C10。该三株杂交瘤细胞在体外连续传代30代和冻存后再复苏均不影响抗体分泌的稳定性。