大肠杆菌不耐热肠毒素(Escherichia coli heat-labile enterotoxin,LT)是分泌到细胞周质的一种热不稳定肠毒素,它由A、B两个亚单位组成,能导致旅行者和猪等家畜的严重腹泻,目前还没有预防此疾病的有效疫苗。LT不仅具有很强的黏膜免疫原性,还拥有较强的黏膜免疫佐剂效应。由于LTA的毒副作用限制了其应用,我们将无毒性的B亚单位作为研究对象。我们试图通过制备LTB重组蛋白,研究其作为疫苗预防幼畜腹泻的可能性,并将其与减毒沙门氏菌疫苗共同免疫BALB/c小鼠,以研究其黏膜免疫佐剂效应。研究目的：研究LTB作为疫苗预防幼畜腹泻的可能性；研究LTB作为黏膜免疫佐剂对减毒沙门氏菌疫苗的佐剂效应。研究方法：查阅GenBank中公布的LTB基因序列,利用软件设计引物,PCR扩增LTB目的基因,载体质粒pCold-TF和PCR产物经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后,将回收的载体和LTB片段用T4连接酶连接,构建pCold-TF/LTB重组质粒,对重组质粒进行鉴定。将pCold-TF/LTB重组质粒转化入大肠杆菌BL21,接着用IPTG进行低温过夜诱导表达,取上清通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证后再通过His标签亲和纯化,获得可溶性蛋白TF/LTB,用ELISA对纯化后的TF/LTB蛋白进行鉴定。纯化的TF/LTB蛋白用来免疫BALB/c小鼠,三免后用间接ELISA法对血清和粪便的IgG和IgA水平进行检测,并用肠毒素大肠杆菌ETEC K88对免疫后的小鼠进行免疫保护实验,用来研究LTB作为疫苗预防幼畜腹泻的可能性。沙门氏菌减毒疫苗与纯化的TF/LTB蛋白三免后同样用间接ELISA法检测粪便中的IgA水平,用来研究LTB的黏膜免疫佐剂效应。研究结果：通过PCR成功扩增LTB基因；成功构建pCold-TF/LTB重组质粒；获得TF/LTB重组蛋白；TF/LTB作为疫苗预防幼畜腹泻有一定效果；TF/LTB对沙门氏菌减毒疫苗具有黏膜免疫佐剂效应。研究结论：重组TF/LTB为预防幼畜腹泻疫苗的研究提供了有利工具；TF/LTB能够作为减毒沙门氏菌疫苗的黏膜免疫佐剂。