为了研究Musclin在畜禽骨骼肌中的作用，本文以猪、鸡、牛、羊和兔为研究对象，依据报道的人、小鼠和大鼠Musclin基因序列对猪、牛、羊、兔和鸡的ESTs库和UniGene进行搜索，利用搜索的ESTs拼接序列设计引物进行RT-PCR，成功克隆了各种动物的Musclin基因。最后选择猪的Musclin基因进行原核表达、蛋白纯化和Western blotting鉴定。主要结果如下： 羊Musclin基因的克隆与序列分析克隆的羊Musclin基因包含一个完整的开放阅读框架(open reading frame，ORF)，全长为413bp，编码由132个氨基酸残基组成的Musclin前蛋白，其中酸性氨基酸为19个，碱性氨基酸为24个，分子量为14.53 kDa，等电点为10.926。预测的信号肽区为27～28个氨基酸.成熟的Musclin由104～105个氨基酸组成。通过预测的氨基酸序列分析，在序列中含有“KKKR”结构和与小鼠ANP、BNP、CNP蛋白的同源性区域。 兔Musclin基因的克隆与序列分析克隆的兔Musclin基因包含一个完整的开放阅读框架，其全长为409bp，编码有132个氨基酸。克隆的Musclin基因与小鼠、大鼠、人、猪和鸡的同源性分别为78.2％、79％、87.9％、98.2％和46.7％，推测的氨基酸序列同源性分别为73.1％、74.2％、87.9％、96.2％和56.8％，氨基酸序列含有“KKKR”结构和与小鼠ANP，BNP，CNP蛋白的同源性区域。 鸡Musclin基因的克隆与序列分析克隆测序结果表明，克隆的鸡Musclin基因序列中包含了完整的ORF，其ORF长度与人基因一致(402bp)。基因序列与哺乳类人、大鼠、小鼠相比较，同源性分别为74％，73％，70％。鸡Musclin推测编码氨基酸序列长度为133aa，SignalP预测信号肽为N-端1～30aa，氨基酸序列中含有“KKKR”结构和与小鼠ANP，BNP，CNP蛋白的同源性区域说明鸡Musclin结构特征与人、大鼠和小鼠Musclin相一致。氨基酸序列与哺乳类人、大鼠、小鼠的基因相比较，同源性分别为58％，54％，50％。 牛Musclin基因的克隆与序列分析克隆的牛Musclin基因包含一个完整的开放阅读框架(open reading frame，ORF)，全长为413bp，编码由132个氨基酸残基组成的Musclin前蛋白，其中酸性氨基酸为19个，碱性氨基酸为24个，分子量为14.53 kDa，等电点为10.926。预测的信号肽区为27～28个氨基酸.成熟的Musclin由104～105个氨基酸组成。通过预测的氨基酸序列分析，在序列中含有"KKKR”结构和与小鼠ANP、BNP、CNP蛋白的同源性区域的结构特征。牛Musclin基因预测的氨基酸序列与人、大鼠、小鼠、猪和鸡的同源性分别为93.2％、80.3％、78.5％、84.1％和60.6％。其中牛的信号肽与人、大鼠、小鼠、猪和鸡的同源性分别为89.3％、84.6％、80.8％、82.1％和35.7％。牛的成熟肽与人、大鼠、小鼠、猪和鸡的同源性分别为93.3％、 78.8％、76％、84.6％和67.6％。 猪Musclin基因的克隆与序列分析电子克隆后序列长度651bp。ORF开放阅读框分析表明，开放阅读框长399 bp(54-452 bp)编码132个氨基酸。与人、小鼠和大鼠的骨骼肌肌肉素基因cDNA编码区有较高同源性，同源性分别为87.2％、77.6％和77.9％。猪肌肉素推测编码氨基酸序列长度为132aa，SignalP预测信号肽为N-端1～27aa，氨基酸序列中含有“KKKR”结构和与小鼠ANP，BNP，CNP蛋白的同源性区域说明猪肌肉素结构特征与人、人鼠和小鼠肌肉素相一致。与人、小鼠和人鼠的骨骼肌肌肉素蛋白序列同源性分别为87.1％、72.3％和72.7％。在开放阅读框两端设计特异引物，以骨骼肌总mRNA为模板进行RT-PCR实验验证，结果与电子克隆结果完全一致。将构建好的原核表达载体转入BL21人肠杆菌中进行表达，表达的蛋白条带人约38.59 kDa，和预期融合蛋白GST-Musclin的分子量一致。通过Western blotting的鉴定，证明得到的蛋白的确是融合蛋白。